3M Petrifilm™ Enterobacteriaceae Count Plates Istruzioni per l'uso

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Data di pubblicazione: 2017-12

Istruzioni sul prodotto

Piastra per il conteggio di Enterobacteriaceae

Descrizione del prodotto e uso previsto

La Piastra 3M™ Petrilm™ per il conteggio di Enterobacteriaceae (EB) è un sistema con terreno di coltura pronto per l'uso

che contiene sostanze nutritive modicate Violet Red Bile Glucose (VRBG), una sostanza gelicante solubile in acqua

fredda e un indicatore al tetrazolio atto a facilitare il conteggio delle colonie. Le Piastre 3M Petrilm EB sono usate per

il conteggio di Enterobacteriaceae nei settori alimentare, delle bevande e dell'acqua in bottiglia. Le Enterobacteriaceae

sono microrganismi ossidasi negativi, gram-negativi che fermentano il glucosio per produrre acido e/o gas. Sulle Piastre

3M Petrilm EB, le Enterobacteriaceae appariranno come colonie rosse con zone gialle, colonie rosse con bolle di gas o

colonie rosse con zone gialle e bolle di gas. I componenti della Piastra 3M Petrilm EB sono decontaminati, seppure non

sterilizzati. 3M Sicurezza Alimentare è certicata secondo ISO (International Organization for Standardization) 9001 per la

progettazione e la produzione. Le Piastre 3M Petrilm EB non sono state valutate con tutti i prodotti alimentari, i processi

alimentari, i protocolli di test o tutti i possibili ceppi di Enterobacteriaceae o di altri batteri.

Sicurezza

L'utente è tenuto a leggere, comprendere e seguire tutte le informazioni di sicurezza contenute nelle istruzioni relative

alla Piastra 3M Petrilm EB. Conservare le istruzioni di sicurezza per poterle consultare in futuro.

AVVERTENZA: indica una situazione pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare la morte o lesioni gravi e/o

danni materiali.

W AVVERTENZA

Per ridurre i rischi associati all’esposizione a pericoli biologici e alla contaminazione ambientale:

• Seguire gli standard di settore e le normative locali vigenti per lo smaltimento dei riuti a rischio biologico.

Per ridurre i rischi associati al rilascio di un prodotto contaminato:

• Seguire tutte le istruzioni relative alla conservazione del prodotto contenute nelle istruzioni per l'uso.

• Non utilizzare dopo la data di scadenza.

Per ridurre i rischi associati all'infezione batterica e alla contaminazione del luogo di lavoro:

• Eseguire il test con la Piastra 3M Petrilm EB in un laboratorio adeguatamente equipaggiato, sotto la supervisione di

un microbiologo esperto.

• L'utente è tenuto a formare il proprio personale alle attuali tecniche di analisi appropriate: ad esempio, Good

Laboratory Practices

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, ISO/EIC 17025

2

o ISO 7218

3

.

Per ridurre i rischi associati a un'interpretazione errata dei risultati:

• 3M non ha documentato l'uso delle Piastre 3M Petrilm EB nell'ambito di settori diversi da quello alimentare, delle

bevande e dell'acqua in bottiglia. Ad esempio, 3M non ha documentato l'uso delle Piastre 3M Petrilm EB per

analizzare sostanze farmaceutiche o cosmetici. 3M non ha documentato le Piastre 3M Petrilm EB per testare le

acque di supercie e municipali, oppure le acque utilizzate nelle industrie farmaceutica o cosmetica.

• L'uso delle Piastre 3M Petrilm EB per testare campioni di acqua in conformità alle normative locali per i test idrici è

a esclusiva discrezione e responsabilità dell'utente nale. Le Piastre 3M Petrilm EB non sono state testate con tutti i

possibili campioni di acque in bottiglia, protocolli di test o con tutti i possibili ceppi di microrganismi.

• Non utilizzare le Piastre 3M Petrilm EB per la diagnosi di condizioni patologiche in esseri umani e animali.

• Le Piastre 3M Petrilm EB non sono in grado di dierenziare tra loro i diversi ceppi di Enterobacteriaceae.

Per ulteriori informazioni, consultare la scheda di sicurezza.

Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure speciche, visitare il nostro sito Web all'indirizzo

www.3M.com/foodsafety o contattare il distributore o il rappresentante 3M di zona.

Responsabilità dell'utente

Gli utenti sono tenuti a leggere e apprendere le istruzioni e le informazioni sul prodotto. Visitare il nostro sito web

all'indirizzo www.3M.com/foodsafety o contattare il distributore o rappresentante 3M di zona per ulteriori informazioni.

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Nella scelta di un metodo di test, è importante tener conto del fatto che fattori esterni quali i metodi di campionamento,

i protocolli di test, la preparazione del campione, la manipolazione e le tecniche di laboratorio possono inuenzare i

risultati.

È responsabilità dell'utente, nel selezionare un qualsiasi metodo di analisi o prodotto, valutare un numero suciente

di campioni con le matrici appropriate e con particolari caratteristiche microbiche per soddisfare i criteri relativi alla

metodologia di analisi scelta dall'utente.

L'utente ha inoltre la responsabilità di accertarsi che tutti i metodi di analisi utilizzati e i risultati ottenuti soddisno i

requisiti dei propri clienti e fornitori.

Come per qualsiasi metodo di analisi, i risultati ottenuti grazie al prodotto di Sicurezza Alimentare 3M non costituiscono

una garanzia della qualità delle matrici o dei processi sottoposti a prova.

Limitazione di garanzia/Rimedio limitato

SALVO NEI CASI ESPRESSAMENTE INDICATI IN UNA SEZIONE DI GARANZIA LIMITATA DELLA SINGOLA

CONFEZIONE DEL PRODOTTO, 3M NON RICONOSCE ALCUNA GARANZIA ESPLICITA O IMPLICITA, INCLUSE,

MA NON A ESSE LIMITATE, LE EVENTUALI GARANZIE DI COMMERCIABILITÀ O DI IDONEITÀ A UNO SCOPO

PARTICOLARE. Qualora un prodotto 3M Sicurezza alimentare sia difettoso, 3M o il suo distributore autorizzato

provvederanno, a loro discrezione, alla sostituzione o al rimborso del prezzo d'acquisto del prodotto. Questi sono gli

unici rimedi a disposizione del cliente. Si dovrà avvisare immediatamente 3M entro sessanta giorni dal riscontro di

eventuali difetti sospetti nel prodotto, provvedendo a rispedirlo a 3M. Chiamare il servizio clienti (negli USA:

1-800-328-1671) o rivolgersi al rappresentante autorizzato della Sicurezza Alimentare 3M per ottenere l'Autorizzazione

alla restituzione del prodotto.

Limitazione di responsabilità da parte di 3M

3M NON SARÀ RESPONSABILE DI PERDITE O DANNI, DIRETTI, INDIRETTI, SPECIALI, INCIDENTALI O EMERGENTI,

INCLUSA, MA NON IN VIA STRETTAMENTE LIMITATIVA, LA PERDITA DI PROFITTO. In nessun caso la responsabilità

legale di 3M andrà oltre il prezzo d'acquisto del prodotto presunto difettoso.

Conservazione

Conservare le buste di Piastre 3M Petrilm EB sigillate in frigorifero o nel congelatore a temperatura inferiore o pari a 8

°C (46 °F). Prima dell’uso, attendere che le buste di Piastre 3M Petrilm EB sigillate abbiano raggiunto la temperatura

ambiente prima di aprirle. Riporre le Piastre 3M Petrilm EB inutilizzate nella busta originale. Sigillare ripiegando

l'estremità della busta e applicando del nastro adesivo. Non refrigerare le buste aperte per evitarne l'esposizione

all’umidità. Le buste di Piastre 3M Petrilm EB risigillate vanno conservate in un luogo fresco e asciutto per non oltre

quattro settimane. Si raccomanda di conservare le buste di Piastre 3M Petrilm EB risigillate in un congelatore (vedere

sotto) se la temperatura del laboratorio supera i 25 °C (77 °F) e/o il laboratorio si trova in un'area dove l'umidità relativa

supera il 50% (con l'eccezione di locali dotati di aria condizionata).

Per conservare le buste aperte in un congelatore, inserire le Piastre 3M Petrilm EB in un contenitore sigillabile.

Per l'utilizzo delle Piastre 3M Petrilm EB congelate aprire il contenitore, togliere le piastre necessarie e rimettere

immediatamente le rimanenti nel contenitore sigillato e quindi nel congelatore. Le piastre non devono essere utilizzate

dopo la data di scadenza. Il congelatore utilizzato per conservare le buste aperte non deve disporre di un ciclo di

scongelamento automatico, poiché ciò esporrebbe ripetutamente le piastre a livelli di umidità che possono danneggiarle.

Non utilizzare le Piastre 3M Petrilm EB in presenza di segni di scolorimento. La data di scadenza e il numero di lotto

sono riportati su ciascuna confezione di Piastre 3M Petrilm EB. Il numero di lotto è anche riportato sulle singole Piastre

3M Petrilm EB. Non utilizzare le Piastre 3M Petrilm EB dopo la data di scadenza.

Smaltimento

Dopo l’uso, le Piastre 3M Petrilm EB potrebbero contenere microorganismi che possono rappresentare un potenziale

rischio biologico. Seguire le normative vigenti del settore per lo smaltimento.

Istruzioni per l’uso

Seguire attentamente tutte le istruzioni. In caso contrario, si rischia di ottenere risultati non precisi.

Preparazione e incubazione di campioni dei settori alimentare e delle bevande (a esclusione dell'acqua in bottiglia)

includendo campioni ambientali

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Preparazione del campione

1. Usare i diluenti sterili appropriati:

Acqua di diluizione con tampone fosfato di Buttereld

4

, diluente peptone salino

5

, acqua peptonata 0,1%

4

, acqua

peptonata tamponata

5

, soluzione di idrogenofosfato di dipotassio

5

, soluzione salina (0,85 – 0,90%), brodo letheen senza

bisolfati o acqua distillata. Per i requisiti specici, consultare la sezione “Istruzioni speciche per metodi validati”.

Non utilizzare diluenti contenenti citrato, bisolto o tiosolfato con le Piastre 3M Petrilm EB: possono inibire

la crescita. Se nella procedura standard viene indicato il tampone citrato, sostituire con uno dei tamponi elencati

sopra, riscaldato a 40-45 °C (104-113 °F).

2. Miscelare o omogeneizzare il campione.

3. Per una crescita ottimale e una ripresa della vitalità dei microrganismi, regolare il pH della sospensione del campione

tra 6,5 e 7,5. Per i prodotti acidi, regolare il pH con 1 N NaOH. Per i prodotti alcalini, regolare il pH con 1 N HCl.

Piastratura

1. Posizionare la Piastra 3M Petrilm EB su una supercie piana e livellata.

2. Sollevare la pellicola superiore e con la pipetta perpendicolare all'area di inoculazione erogare 1 ml di sospensione

del campione sul centro della pellicola inferiore.

3. Srotolare la pellicola superiore sul campione per evitare di intrappolare eventuali bolle d’aria.

4. Collocare il Diusore per Piastre 3M™ Petrilm™ con il lato piatto rivolto verso il basso al centro della Piastra 3M

Petrilm EB. Distribuire uniformemente il campione esercitando una leggera pressione al centro del Diusore per

piastre 3M Petrilm. Distribuire l'inoculo sull'intera area di crescita della Piastra 3M Petrilm EB prima che si formi il

gel. Non far scorrere il Diusore per piastre 3M Petrilm sulla pellicola.

5. Rimuovere il Diusore per Piastre 3M Petrilm e lasciare riposare la Piastra 3M Petrilm EB per almeno un minuto in

modo da consentire la formazione del gel.

Incubazione

Incubare le Piastre 3M Petrilm EB in posizione orizzontale, con il lato trasparente rivolto verso l’alto in pile di non

oltre 20 Piastre 3M Petrilm EB. Incubare le Piastre 3M Petrilm EB per 24 ore ± 2 ore. È possibile utilizzare tempi e

temperature di incubazione diversi a seconda dei metodi di riferimento locali, alcuni dei quali sono riportati nella sezione

seguente “Istruzioni speciche per metodi validati”.

Preparazione e incubazione dei campioni di acqua in bottiglia

Idratazione della Piastra 3M Petrilm EB

1. Posizionare la Piastra 3M Petrilm EB su una supercie piana e livellata.

2. Sollevare la pellicola superiore e dosare 1 ml di diluente di idratazione sterile appropriato sul centro della pellicola

inferiore. Tra i diluenti per idratazione sterili appropriati vi sono l'acqua distillata, deionizzata (DI) e ottenuta

mediante osmosi inversa (RO).

3. Srotolare la pellicola superiore sul campione per evitare di intrappolare eventuali bolle d’aria.

4. Collocare il Diusore per Piastre 3M Petrilm con il lato piatto rivolto verso il basso al centro della piastra.

Distribuire uniformemente il diluente, esercitando una leggera pressione verso il basso al centro del diusore di

plastica. Distribuire il diluente sull'intera area di crescita della piastra 3M Petrilm prima che si formi un gel. Non far

scorrere il diusore sulla pellicola.

5. Rimuovere il diusore 3M Petrilm e consentire alle piastre di rimanere chiuse per un minimo di 1 ora prima

dell'utilizzo.

6. Conservare le Piastre 3M Petrilm EB idratate in una busta sigillata o in un sacchetto di plastica. Proteggere le

piastre dall'esposizione alla luce e conservarle in frigorifero a 2-8 °C (36-46 °F) per un periodo massimo di 7 giorni.

Filtraggio dell'acqua e incubazione della piastra

1. Seguendo le procedure standard per l'analisi delle acque, ltrare con membrana il campione di acqua utilizzando un

ltro da 47 mm e con dimensioni dei pori di 0,45 micron in MCE (Mixed Cellulose Ester).

2. Sollevare attentamente la pellicola superiore della Piastra 3M Petrilm EB. Evitare di toccare l'area della supercie di

crescita circolare. Posizionare il ltro al centro dell'area idratata.

3. Sostituire lentamente la pellicola superiore sul ltro a membrana. Evitare di intrappolare eventuali bolle d'aria e di

creare spazi tra il ltro e la Piastra 3M Petrilm EB.

4. Applicare una leggera pressione utilizzando il diusore 3M Petrilm o facendo scivolare un dito su tutta l'area del

disco (inclusi i bordi) per assicurare un contatto uniforme del ltro con il gel e per eliminare eventuali bolle d'aria.

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Incubazione

Incubare le Piastre 3M Petrilm EB a 34 °C-37 °C per 24 ± 2 ore in posizione orizzontale, con la faccia trasparente

rivolta verso l'alto in pile di non oltre 20.

Interpretazione

1. Le Piastre 3M Petrilm EB possono essere sottoposte a conteggio mediante un conta colonie standard o un'altra

sorgente di luce ingrandita. Le colonie sulla barriera schiumosa non vanno prese in considerazione a causa della loro

rimozione dall’inuenza selettiva del terreno di coltura. Non contare le bolle artefatte che potrebbero essere presenti.

2. Le Enterobacteriaceae sono colonie rosse con zone gialle e/o colonie rosse con bolle di gas con o senza zone gialle.

Le colonie non associate a bolle di gas (la distanza tra la colonia e la bolla in tal caso deve essere maggiore del

diametro della colonia) né associate a una zona gialla non vengono conteggiate come Enterobacteriaceae.

3. L'area di crescita circolare è pari a 20 cm

2

circa. È possibile stimare i conteggi sulle Piastre 3M Petrilm EB

contenenti più di 100 colonie, contando il numero di colonie presenti in due o più quadratini rappresentativi e

determinando il numero medio per quadratino. Moltiplicare il numero medio per 20 al ne di determinare la conta

stimata per piastra.

4. Le Piastre 3M Petrilm EB con un grande numero di colonie presentano un’intensicazione del colore del gel o

possono diventare completamente gialle e presentare una delle seguenti caratteristiche o entrambe: molte piccole

colonie indistinte e/o molte bolle di gas. Quando ciò avviene, registrare il risultato come TNTC (Too Numerous To

Count, troppo numerose per essere contate). Se occorre una conta eettiva, la diluizione dovrà essere maggiore.

5. Se necessario, le colonie possono essere isolate per un'ulteriore identicazione. Sollevare la pellicola superiore

adottando tecniche di analisi appropriate e prelevare la colonia dal gel. Analizzare la colonia mediante le procedure

standard.

6. Se non è possibile eseguire il conteggio delle Piastre 3M Petrilm EB entro 1 ora dalla rimozione dall'incubatore,

possono essere congelate e conservate per il conteggio dierito in un contenitore sigillabile a una temperatura pari

o inferiore a -15 °C (5 °F) per non più di una settimana.

Nota: il conteggio ritardato di Piastre 3M Petrilm EB con ltri a membrana non è consigliato.

Per ulteriori informazioni fare riferimento a “Guida all'interpretazione delle Piastre 3M™ Petrilm™ Enterobacteriaceae”.

Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure speciche, visitare il nostro sito Web all'indirizzo

www.3M.com/foodsafety o contattare il distributore o il rappresentante 3M di zona.

Istruzioni speciche per metodi validati

AOAC® Ocial Methods

SM

Ambito della validazione: 2003.01 Conteggio delle Enterobacteriaceae in alimenti selezionati

Incubazione

Incubare le Piastre 3M Petrilm EB per 24 ore ± 2 ore a 37 °C ± 1 °C.

NF Validation concessa dalla AFNOR Certication

Metodo certicato NF Validation in conformità a ISO 16140-2

6

in confronto a ISO 21528-2

7

(3M – 01/6 – 09/97)

Utilizzare i seguenti dettagli quando si applicano le Istruzioni per l'uso di cui sopra:

Ambito della validazione: per l'analisi di tutti i prodotti alimentari destinati all'uomo, all'alimentazione degli animali e

campioni ambientali del settore.

Preparazione del campione: utilizzare esclusivamente diluenti ISO

5

.

Incubazione

Incubare le Piastre 3M Petrilm EB per 24 ore ± 2 ore a 30 °C ±1 °C o 37 °C ± 1 °C.

Interpretazione

Calcolare il numero di microrganismi presenti nel campione del test in base a ISO 7218

3

per una piastra per diluizione.

Ai ni del calcolo, prendere in considerazione solo le Piastre 3M Petrilm EB contenenti no a 100 colonie. Le stime

esulano dall’ambito della NF Validation Certication (vedere il paragrafo 3 della sezione Interpretazione).

5

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IT

3M 01/06 – 09/97

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS

http://nf-validation.afnor.org/en

Per maggiori informazioni sulla scadenza, consultare il certicato NF VALIDATION, disponibile sul sito web menzionato

in precedenza.

Bibliograa

1. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice for

Nonclinical Laboratory Studies.

2. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

3. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus – General rules for microbiological examination.

4. FDA. Bacteriological Analytical Manual (BAM), Reagents Index for BAM found at:

http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm055791.htm.

5. ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stus – Preparation of test samples, initial suspension and

decimal dilutions for microbiological examination.

6. ISO 16140-2. Microbiology of the food chain – Method Validation -- Protocol for the validation of alternative

(proprietary) methods against a reference method.

7. ISO 21528-2. Microbiology of food and animal feeding stus – Horizontal methods for the detection and

enumeration of Enterobacteriaceae – Part 2: colony count method.

Fare riferimento alle versioni attuali dei metodi standard elencati in precedenza.

Legenda dei simboli

www.3M.com/foodsafety/symbols

AOAC è un marchio registrato di AOAC INTERNATIONAL

Ocial Methods è un marchio di servizio di AOAC INTERNATIONAL

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