3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Istruzioni per l'uso

La pagina sta caricando ...

35

3

Data di pubblicazione: 2019-01

Istruzioni sul prodotto

Analisi molecolare di seconda generazione per il rilevamento

diCampylobacter

Descrizione del prodotto e uso previsto

L’Analisi molecolare di seconda generazione 3M™ per il rilevamento di Campylobacter è utilizzata con il Sistema

per l’analisi molecolare 3M™ per il rilevamento rapido e specico di Campylobacter jejuni, Campylobacter lari e

Campylobacter coli in alimenti arricchiti e campioni ambientali derivanti da processi di trasformazione alimentare.

L’Analisi molecolare 3M per il rilevamento dei microrganismi patogeni utilizza l’amplicazione isotermica mediata da loop

per amplicare rapidamente le sequenze di acidi nucleici a elevata specicità e sensibilità, combinata alla bioluminescenza

per rilevare l’amplicazione. I risultati presunti positivi sono riportati in tempo reale, mentre quelli negativi si visualizzano al

completamento dell’analisi. I risultati presunti positivi vanno confermati utilizzando il proprio metodo d’elezione o secondo

quanto specicato dalle normative locali

(1,2)

.

L’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter è destinata all’uso in un ambiente

di laboratorio da parte di professionisti formati in tecniche di laboratorio. 3M non ha documentato l’utilizzo del presente

prodotto in settori diversi da quello alimentare e delle bevande. Ad esempio, 3M non ha documentato il presente prodotto

per l’analisi su campioni di tipo farmaceutico, cosmetico, clinico o veterinario. L’Analisi molecolare di seconda generazione

3M per il rilevamento di Campylobacter non è stata valutata con tutti i possibili prodotti alimentari, processi alimentari,

protocolli di test o ceppi di batteri.

Come tutti i metodi analitici, i risultati possono essere inuenzati dall’origine, dalla formulazione e dalla qualità del

terreno di arricchimento. Anche fattori quali i metodi di campionamento, i protocolli di analisi, la preparazione del

campione, la manipolazione e le tecniche di laboratorio possono inuenzare i risultati. 3M consiglia la valutazione del

metodo, compreso il terreno di arricchimento, nell’ambiente dell’utente, utilizzando un numero suciente di campioni che

presentano particolari caratteristiche alimentari e microbiche, per assicurare che il metodo soddis i criteri dell’utente.

3M ha valutato l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter con il Brodo di

arricchimento 3M™ perCampylobacter e il brodo di arricchimento privo di sangue Bolton.

Lo Strumento per l’analisi molecolare 3M™ è destinato all’uso su campioni sottoposti a trattamento termico durante

la fase di lisi dell’analisi, atto ad annientare gli organismi presenti nel campione. I campioni non correttamente trattati

termicamente durante la fase di lisi dell’analisi possono essere considerati un potenziale rischio biologico e NON devono

essere inseriti nello Strumento per l’analisi molecolare 3M.

3M Food Safety è certicata ISO (International Organization for Standardization) 9001 per la progettazione e la

produzione.

Il kit di prova per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter è composto da

96test, descritti nella Tabella 1.

Tabella 1. Componenti del kit di analisi molecolare 3M

Articolo Identicazione Quantità Contenuto Commenti

Soluzione di lisi (LS) 3M™

Soluzione rosa in tubi

trasparenti

96 (12 strisce

da8tubi)

580 μl di LS per tubo

In rastrelliera

e pronti

all’uso

Tubi di reagente per l’Analisi

molecolare di seconda

generazione 3M™ per il

rilevamento di Campylobacter

Tubi viola

96 (3 buste;

contenenti 4 strisce

da 8 tubi)

Miscela di rilevamento

e amplicazione

specica liolizzata

Pronti all’uso

Tappi supplementari Tappi viola

96 (12 strisce da

8tappi)

Pronti all’uso

Controllo reagente 3M™ (RC)

Tubi trasparenti con

apertura a scatto

16 (2 buste da

8tubisingoli)

Miscela di rilevamento

e amplicazione DNA

di controllo liolizzato

Pronti all’uso

Il controllo negativo (NC), non fornito nel kit, è un terreno di arricchimento sterile, ad esempio Brodo di arricchimento 3M

(Italiano)

IT

36

perCampylobacter. Non utilizzare l’acqua come NC.

Una guida introduttiva rapida è disponibile sul sito web www.3M.com/foodsafety

Sicurezza

L’utente è tenuto a leggere, comprendere e seguire tutte le informazioni per la sicurezza contenute nelle istruzioni

del Sistema per l’analisi molecolare 3M e dell’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di

Campylobacter. Conservare le istruzioni di sicurezza per poterle consultare in futuro.

AVVERTENZA: indica una situazione pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare la morte o lesioni gravi

e/o danni materiali.

AVVISO: indica una situazione potenzialmente pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare

dannimateriali.

W AVVERTENZA

Non utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter per la diagnosi delle

condizioni di soggetti umani o animali.

L’utente deve addestrare il proprio personale nell’esecuzione corretta delle tecniche di prova: ad esempio, buone

prassi di laboratorio

(3)

, ISO/IEC 17025

(4)

, o ISO 7218

(5)

.

Per ridurre i rischi associati a risultati falsi negativi che comportano l’emissione di un prodotto contaminato:

• Attenersi al protocollo ed eseguire i test esattamente come descritto nelle Istruzioni sul prodotto.

• Conservare l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter come indicato sulla

confezione e nelle Istruzioni sul prodotto.

• Utilizzare sempre l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter entro la data di

scadenza.

• Preparare il Brodo di arricchimento 3M™ perCampylobacter seguendo le Istruzioni sul prodotto

• Non sterilizzare in autoclave il Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter

• Utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter su campioni ambientali

e alimentari che sono stati validati internamente o da terzi.

• Utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter solo con superci,

disinfettanti, protocolli e ceppi di batteri che sono stati validati internamente o da terzi.

• Per un campione ambientale contenente un tampone neutralizzante con il complesso di aril solfonato, eseguire una

diluizione in rapporto 1:2 prima di eseguire il test (1 parte di campione in 1 parte di brodo di arricchimento sterile).

Un’altra opzione consiste nel trasferire 10µl di arricchimento del tampone neutralizzante all’interno dei tubi per

soluzione di lisi 3M. Prodotti per il trattamento dei campioni di 3M™ che includono Tampone neutralizzante con

complesso aril-solfonato: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G, e

HS2410NB2G.

Per ridurre i rischi associati all’esposizione a sostanze chimiche e a pericoli biologici

• Eseguire un test per patogeni in un laboratorio adeguatamente equipaggiato, sotto la supervisione di personale

esperto. Il terreno di arricchimento incubato e le attrezzature o le superci che sono venute in contatto con il terreno di

arricchimento incubato potrebbero contenere patogeni a livelli sucienti da comportare rischi per la salute umana.

• Durante la manipolazione di reagenti e campioni contaminati, seguire sempre le pratiche standard di sicurezza di

laboratorio, compreso l’utilizzo di abbigliamento protettivo e protezioni appropriate per gli occhi.

• Evitare il contatto con il contenuto dei tubi di reagente e del terreno di arricchimento dopo l’amplicazione.

• Smaltire i campioni arricchiti in conformità agli standard normativi locali/regionali/nazionali.

• I campioni non correttamente trattati termicamente durante la fase di lisi dell’analisi possono essere considerati un

potenziale rischio biologico e NON devono essere inseriti nello Strumento per l’analisi molecolare 3M.

Per ridurre i rischi associati alla contaminazione crociata durante la preparazione dell’analisi

• Indossare sempre i guanti (per proteggere l’utente e prevenire l’introduzione di nucleasi).

Per ridurre i rischi associati all’esposizione a liquidi caldi

• Non superare l’impostazione di temperatura raccomandata sul riscaldatore.

• Non superare il tempo di riscaldamento raccomandato.

• Utilizzare un termometro calibrato e appropriato per vericare la temperatura dell’Inserto del blocco di calore per il

sistema di rilevamento molecolare 3M™ (ad es., un termometro a immersione parziale o con termocoppia digitale,

non un termometro a immersione totale). Il termometro deve essere collocato nella posizione indicata nell’Inserto del

blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M.

(Italiano)

IT

37

AVVISO

Per ridurre i rischi associati alla contaminazione crociata durante la preparazione dell’analisi

• Cambiare i guanti prima di idratare le pastiglie di reagente.

• Si consiglia di utilizzare punte di pipetta di grado biologico molecolare sterili con barriera di aerosol (ltrate).

• Utilizzare una nuova punta di pipetta per ciascun trasferimento di campione.

• Adottare buone prassi di laboratorio per trasferire il campione dall’arricchimento al tubo di lisi. Per evitare la

contaminazione della pipettatrice, l’utente può scegliere di aggiungere una fase di trasferimento intermedia. Ad

esempio, l’utente può trasferire ciascun campione arricchito in un tubo sterile.

• Utilizzare una stazione di lavoro di biologia molecolare contenente una lampada germicida, laddove disponibile.

• Decontaminare periodicamente i banchi e l’attrezzatura di laboratorio (pipette, strumenti di inserimento/rimozione del

tappo ecc.) con una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione per la

rimozione del DNA.

Per ridurre i rischi associati a un risultato falso positivo

• Non aprire mai i tubi di reagente dopo l’amplicazione.

• Gettare sempre i tubi contaminati immergendoli in una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in

acqua v:v) per 1 ora lontano dall’area di preparazione dell’analisi.

• Non sterilizzare mai in autoclave i tubi di reagente dopo l’amplicazione.

Per ulteriori informazioni, consultare la Scheda di sicurezza dei materiali e le normative locali per lo smaltimento.

Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure speciche, visitare il nostro sito web all’indirizzo

www.3M.com/foodsafety o contattare il distributore o il rappresentante 3M di zona.

Responsabilità dell’utente

Gli utenti sono tenuti a leggere e apprendere le istruzioni e le informazioni sul prodotto. Visitare il nostro sito web

all’indirizzo www.3M.com/foodsafety o contattare il distributore locale o rappresentante 3M per ulteriori informazioni.

Nella scelta di un metodo di test, è importante tener conto del fatto che fattori esterni quali i metodi di campionamento, i

protocolli di test, la preparazione del campione, la manipolazione, le tecniche di laboratorio e il campione stesso possono

inuenzare i risultati.

È responsabilità dell’utente, nel selezionare un qualsiasi metodo di analisi o prodotto, valutare un numero suciente

di campioni con le matrici appropriate e con particolari caratteristiche microbiche per soddisfare i criteri relativi alla

metodologia di analisi scelta dall’utente.

L’utente ha inoltre la responsabilità di accertarsi che tutti i metodi di analisi utilizzati e i risultati ottenuti soddisno i requisiti

dei propri clienti e fornitori.

Come per qualsiasi metodo di analisi, i risultati ottenuti grazie al prodotto di 3M Food Safety non costituiscono una

garanzia della qualità delle matrici o dei processi sottoposti a prova.

Per aiutare i clienti nella valutazione del metodo per le varie matrici alimentari, 3M ha elaborato il kit di Controllo della

matrice di rilevamento molecolare 3M™. Quando necessario, utilizzare il Controllo della matrice per il sistema di

rilevamento molecolare 3M (MC) per determinare se questa sia in grado di condizionare i risultati dell’Analisi molecolare

di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter. In caso di adozione di un metodo 3M, durante qualsiasi

periodo di valutazione o durante l’esecuzione di test su matrici note o sconosciute o su matrici che hanno subito modiche

di materie prime o in seguito alla lavorazione, analizzare numerosi campioni rappresentativi della matrice, cioè campioni di

diversa origine.

Si denisce matrice un tipo di prodotto con proprietà intrinseche quali la composizione e la lavorazione. Le dierenze fra le

matrici possono essere semplici come gli eetti causati dalle dierenze nella loro lavorazione o presentazione, ad esempio:

crude o pastorizzate, fresche o secche, ecc.

Limitazione di garanzia/Rimedio limitato

SALVO NEI CASI ESPRESSAMENTE INDICATI IN UNA SEZIONE DI GARANZIA LIMITATA DELLA CONFEZIONE DEL

SINGOLO PRODOTTO, 3M NON RICONOSCE ALCUNA GARANZIA ESPLICITA O IMPLICITA, INCLUSE, MA NON A

ESSE LIMITATE, LE EVENTUALI GARANZIE DI COMMERCIABILITÀ O DI IDONEITÀ A UNO SCOPO PARTICOLARE.

Qualora un prodotto della 3M Food Safety sia difettoso, 3M o il suo distributore autorizzato provvederanno, a loro

discrezione, alla sostituzione o al rimborso del prezzo d’acquisto del prodotto. Questi sono gli unici rimedi a disposizione

del cliente. Si dovrà avvisare immediatamente 3M entro sessanta giorni dal riscontro di eventuali difetti sospetti

nel prodotto, provvedendo a rispedirlo a 3M. Chiamare il servizio clienti (negli USA: 1-800-328-1671) o rivolgersi al

rappresentante autorizzato della 3M Food Safety per ottenere l’Autorizzazione alla restituzione del prodotto.

(Italiano)

IT

38

Limitazione di responsabilità da parte di 3M

3M NON SARÀ RESPONSABILE DI PERDITE O DANNI, DIRETTI, INDIRETTI, SPECIALI, INCIDENTALI O EMERGENTI,

INCLUSA, MA NON IN VIA STRETTAMENTE LIMITATIVA, LA PERDITA DI PROFITTO. In nessun caso la responsabilità

legale di 3M andrà oltre il prezzo d’acquisto del prodotto presunto difettoso.

Conservazione e smaltimento

Conservare l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter a 2-8°C (35-47°F). Non

congelare. Conservare il kit lontano da fonti luminose. Dopo aver aperto il kit, vericare che la busta d’alluminio non risulti

danneggiata. Qualora la busta d’alluminio fosse danneggiata, non utilizzare i prodotti contenuti all’interno. Dopo l’apertura,

i tubi di reagente inutilizzati dovrebbero essere sempre conservati in una busta richiudibile con essiccante all’interno per

mantenere la stabilità dei reagenti liolizzati. Conservare le buste richiudibili a 2-8°C (35-47°F) per periodi non superiori a

90 giorni.

Non utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter oltre la data di

scadenza. La data di scadenza e il numero di lotto sono riportati sull’etichetta esterna della scatola. Dopo l’utilizzo, il

terreno di arricchimento e i tubi per l’analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter

possono potenzialmente contenere materiali patogeni. Una volta completato il test, attenersi agli standard di settore vigenti

in materia di smaltimento di riuti contaminati. Per ulteriori informazioni, consultare la Scheda di sicurezza dei materiali e le

normative locali per lo smaltimento.

Istruzioni per l’uso

Seguire attentamente tutte le istruzioni. In caso contrario, si rischia di ottenere risultati non precisi.

Decontaminare periodicamente i banchi e l’attrezzatura di laboratorio (pipette, strumenti di inserimento/rimozione del

tappo ecc.) con una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione per la

rimozione del DNA.

L’utente è tenuto a completare la formazione di qualica operatore (OQ) per il Sistema per l’analisi molecolare 3M, come

descritta nel documento “Protocolli di qualica per l’installazione (IQ)/qualica operativa (OQ) e istruzioni del Sistema per

l’analisi molecolare 3M”

(6)

.

Preparazione dei terreni di coltura

Preparare il Brodo di arricchimento 3M™ perCampylobacter (CE250) seguendo le Istruzioni sul prodotto. Non sterilizzare

in autoclave il terreno di coltura prima dell’uso. Utilizzare il terreno entro 24 ore dalla preparazione. Conservare il brodo

preparato a 2-8°C

(7)

al riparo dalla luce se non sarà utilizzato immediatamente dopo la preparazione. Accertarsi che il

terreno di coltura sia portato a una temperatura di 20-30°C prima dell’uso.

Raccolta dei campioni

Il Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter non deve essere utilizzato per il risciacquo di animali o terreni di

trasporto. Raccogliere e trasportare i campioni in ottemperanza alle procedure stabilite per la raccolta dei campioni.

Arricchimento del campione

Nella Tabella 2 sono riportate le indicazioni sui protocolli di arricchimento generici di campioni ambientali e alimentari.

È responsabilità dell’utente convalidare protocolli di campionamento o rapporti di diluizione alternativi, per assicurare che il

presente metodo di test soddis i propri criteri.

Preparazione del campione

a. Risciacqui di carcasse e di pezzi di pollame crudo

1. Risciacquare una carcassa eviscerata di pollame crudo con 400 ml di Acqua Peptonata Tamponata ISO (BPW) per

un minuto. Per le parti di pollame crudo, risciacquare 1,8-2Kg (4lb ± 10%) di parti di volatili con 400ml di BPW

(1,8)

.

2. Per le carcasse e le parti di pollame crudo, far sgocciolare il liquido in eccesso prima di risciacquare il campione

per evitare il trasferimento di una quantità eccessiva di liquido di lavorazione nella sacca del campione

(8)

.

3. Per il campione trattato con cetilpiridinio cloruro (CPC) è necessario aggiungere 5ml per l di Polisorbato

80 (IUPAC: Poliossietilene (20) sorbitano mono-oleato; CAS 9005-65-6) al Brodo di arricchimento

3MperCampylobacter preparato. È possibile aggiungere Polisorbato 80 all’acqua prima della sterilizzazione

per agevolare la dissoluzione, oppure aggiungerlo direttamente all’acqua sterile prima di preparare il Brodo di

arricchimento 3M perCampylobacter.

4. Trasferire asetticamente 30ml di risciacquo in una sacca sterile e aggiungere 30ml di Brodo di arricchimento

3MperCampylobacter.

(Italiano)

IT

39

b. Spugna di carcassa

1. Idratare le spugne prima di prelevare il campione con al massimo 25ml di BPW

(1)

. Durante il trasporto dei campioni,

accertarsi che il sacchetto sia stato arrotolato e conservato a 2-8°C.

2. Sfregare la carcassa di pollame con un tampone o raccogliere il campione con una spugna.

3. Inserire il tampone in un sacchetto sterile e aggiungere 25ml di Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter.

Accertarsi che il tampone o la spugna sia ricoperto di terreno di arricchimento.

c. Prodotti di pollame crudo

1. Pesare asetticamente 325 ± 32,5g di campione e inserirlo in un sacchetto sterile. Aggiungere 1625 ± 32,5 mldi

BPW al prodotto di pollame crudo. Per sciogliere i grumi, miscelare bene tramite breve massaggio con le mani.

2. Dopo la miscelazione, aggiungere 30ml della miscela di prodotto di pollame crudo in un sacchetto sterile quindi

aggiungere 30ml di Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter e miscelare bene.

d. Carne cruda e pronta al consumo

1. Pesare asetticamente 25g di campione e inserirlo in un sacchetto sterile. Per agevolare il campionamento è

consigliato un sacchetto con ltro.

2. Aggiungere 225ml di Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter.

3. Massaggiare a mano per rompere i grumi, evitare di creare bolle durante la miscelazione. Non trattare il sacchetto

mediante miscelatore o agitatore.

e. Tamponi di avvio della produzione principale

1. Raccogliere campioni con tamponi di avvio o calze seguendo le procedure stabilite per la raccolta dei campioni.

2. Inserire UNA calza all’interno di un sacchetto sterile e aggiungere 100 ml di Brodo di arricchimento 3M

perCampylobacter.

f. Campione prelevato a mano

1. Prelevare il campione con un tampone inumidito in precedenza attenendosi alle procedure di campionamento

stabilite.

2. Inserire il tampone in un sacchetto sterile e aggiungere 100ml di Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter.

Incubazione dell’arricchimento

1. Arrotolare il sacchetto per ridurre al minimo lo spazio di testa ed evitare di esporre l’arricchimento all’aria. Massaggiare

delicatamente il sacchetto per 10 ± 2 secondi. Non trattare il sacchetto mediante miscelatore o agitatore ed evitare

di creare bolle durante la miscelazione.

2. Incubare aerobicamente il sacchetto a 41,5 ± 1°C. Per i tempi di incubazione appropriati, fare riferimento alla tabella 2.

AVVERTENZA: se si sceglie di usare un tampone neutralizzante che contiene complesso aril-solfonato come soluzione

idratante per la spugna, è necessario eseguire una diluizione in rapporto 1:2 (1 parte di campione in 1 parte di brodo di

arricchimento sterile) del campione ambientale arricchito prima di eseguire il test, al ne di ridurre i rischi associati a

risultati falsi negativi che comportino l’emissione di un prodotto contaminato. Un’altra opzione consiste nel trasferire

10µldi arricchimento del tampone neutralizzante all’interno dei tubi per soluzione di lisi 3M.

È responsabilità dell’utente convalidare protocolli di campionamento o rapporti di diluizione alternativi, per assicurare che il

presente metodo di test soddis i propri criteri.

(Italiano)

IT

40

Tabella 2. Protocolli di arricchimento generici.

Matrice campione Dimensione

campione

Brodo di

arricchimento 3M

perCampylobacter

(ml)

(b)

Temperatura di

arricchimento

(± 1°C)

Tempo di

arricchimento

(ore)

Volume

dell’analisi

del campione

(µl)

(c)

• Risciacqui di

carcasse

(a)

• Risciacqui di pezzi

di volatili

(a)

30ml di mezzo di

risciacquo in BPW

30 41,5 22-26 20

• Spugna di

carcassa

(a)

1 spugna

pre-umidicata

conal massimo 25ml

di BPW

25 41,5 22-26 20

• Carne cruda

• Carne pronta al

consumo

25g 225 41,5 24-28 20

• Tamponi di avvio

della produzione

principale

1 tampone da stivale 100 41,5 22-26 20

• Tampone manuale

dalla produzione

principale

1 dispositivo

pre-umidicato

100 41,5 22-26 20

(a) Se i volatili sono trattati con cetilpiridinio cloruro (CPC) è necessario aggiungere 5ml per l di Polisorbato80

(IUPAC: Poliossietilene (20) sorbitano mono-oleato; CAS 9005-65-6) al Brodo di arricchimento 3M

perCampylobacter preparato. È possibile aggiungere Polisorbato 80 all’acqua prima della sterilizzazione, oppure

aggiungerlo all’acqua sterile prima di preparare il Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter.

(b) Utilizzare il Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter entro 24 ore dalla preparazione. Il terreno deve essere a

temperatura ambiente (25-30°C) prima dell’uso.

(c) Prima di prelevare il campione di arricchimento per l’analisi, massaggiare delicatamente il fondo del sacchetto. Dopo

aver raccolto il campione, arrotolare il sacchetto per evitare l’esposizione dell’arricchimento all’aria. Può essere

richiesto un altro campione per la ripetizione dei test o le fasi di conferma.

Istruzioni speciche per metodi validati

AOAC® Performance Tested

SM

(PTM), Certicato n. 111803

Negli studi PTM

SM

dell’Istituto di ricerca AOAC, l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di

Campylobacter è risultata essere un ecace metodo per il rilevamento di Campylobacter. Le matrici testate nello studio

sono riportate nella Tabella 3.

(Italiano)

IT

41

Tabella 3. Protocolli di arricchimento secondo AOAC PTM

SM

, Certicato n. 111803.

Matrice campione Dimensione

campione

Brodo di

arricchimento 3M

perCampylobacter

(ml)

(c)

Temperatura di

arricchimento

(± 1°C)

Tempo di

arricchimento

(ore)

Volume

dell’analisi

del campione

(µl)

(d)

Carcassa intera

risciacquata in 400ml

di BPW

(a) (b)

30ml di mezzo di

risciacquo in BPW

30 41,5 22-26 20

Pezzo di volatile

(1,8-2Kg) risciacquato

in 400ml di BPW

(a) (b)

30ml di mezzo di

risciacquo in BPW

30 41,5 22-26 20

Spugna di carcassa di

tacchino

(a) (b)

1 spugna

pre-umidicata

con al massimo

25mldiBPW

25 41,5 24-26 20

Carne di pollo cruda

macinata (325 ± 32,5g)

risciacquata in

1625 ± 32,5ml BPW

(b)

30ml di miscela

di prodotto in BPW

30 41,5 24-28 20

Crocchette di pollo 25g 225 41,5 24-28 20

(a) Se i volatili sono trattati con cetilpiridinio cloruro (CPC) è necessario aggiungere 5ml per l di Polisorbato80

(IUPAC: Poliossietilene (20) sorbitano mono-oleato; CAS 9005-65-6) al Brodo di arricchimento 3M per

Campylobacter preparato. È possibile aggiungere Polisorbato 80 all’acqua prima della sterilizzazione, oppure

aggiungerlo all’acqua sterile prima di preparare il Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter.

(b) In alternativa, questa matrice può essere arricchita con 30ml di brodo di arricchimento a doppia concentrazione privo

di sangue Bolton (BF-BEB) per 48 ± 2 ore a 42 ± 1,0°C in condizioni microaerobiche. Trasferire 20µl di campione in

soluzione di lisi 3M.

(c) Utilizzare il Brodo di arricchimento 3M perCampylobacter entro 24 ore dalla preparazione. Il terreno deve essere a

temperatura ambiente (25-30°C) prima dell’uso.

(d) Prima di prelevare il campione di arricchimento per l’analisi, massaggiare delicatamente il fondo del sacchetto. Dopo

aver raccolto il campione, arrotolare il sacchetto per evitare l’esposizione dell’arricchimento all’aria. Può essere

richiesto un altro campione per la ripetizione dei test o le fasi di conferma.

Preparazione del Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M™

1. Bagnare un panno o uno stronaccio monouso con una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in

acqua v:v) e pulire il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M.

2. Sciacquare con acqua il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M.

3. Utilizzare un panno usa e getta per asciugare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento

molecolare3M.

4. Assicurarsi che il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M sia asciutto prima

dell’uso.

Preparazione del supporto per il Blocco di rareddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M™

Posizionare il supporto per il Blocco di rareddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M direttamente

sul banco di laboratorio: il Vassoio per blocco di rareddamento estraibile per il sistema rilevamento molecolare 3M non

viene utilizzato. Utilizzare il blocco alla temperatura ambiente del laboratorio (20-25°C).

Preparazione dell’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M™

Posizionare l’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M in un’unità riscaldante a secco con

doppio blocco. Accendere l’unità riscaldante a secco con blocco e impostare la temperatura per consentire all’Inserto del

blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M di raggiungere e mantenere una temperatura di 100 ± 1°C.

(Italiano)

IT

42

NOTA: a seconda dell’unità riscaldante, attendere circa 30 minuti anché l’Inserto del blocco di calore per il sistema

di rilevamento molecolare 3M raggiunga la temperatura. Utilizzando un termometro adeguatamente calibrato (ad es.,

un termometro a immersione parziale o uno digitale a termocoppia, non un termometro a immersione totale) inserito

nella posizione designata, vericare che l’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M sia

a 100 ± 1°C.

Preparazione dello Strumento per l’analisi molecolare 3M™

1. Avviare il software per l’analisi molecolare 3M™ ed eseguire l’accesso. Contattare il proprio rappresentante 3M Food

Safety per vericare che la versione del software in uso sia quella più aggiornata.

2. Accendere lo Strumento per l’analisi molecolare 3M.

3. Creare o modicare un’analisi con i dati per ciascun campione. Fare riferimento al Manuale per l’utente del Sistema per

l’analisi molecolare 3M per i dettagli.

NOTA: lo Strumento per l’analisi molecolare 3M deve raggiungere lo stato Pronto prima di inserire il Vassoio per

caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M con tubi di reazione. Tale fase di riscaldamento dura

20minuti circa ed è indicata da una spia ARANCIONE sulla barra di stato dello strumento. Quando lo strumento è pronto

per avviare l’analisi, la barra di stato diventa VERDE.

Lisi

Rimuovere la parte inferiore della rastrelliera per la soluzione di lisi 3M con un cacciavite prima di posizionarla nell’Inserto

del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M.

1. Far riscaldare i tubi per soluzione di lisi 3M lasciando la rastrelliera a temperatura ambiente (20-25°C) per una notte

(16-18 ore). Le alternative per equilibrare i tubi per soluzione di lisi 3M a temperatura ambiente sono: posizionare i

tubi per soluzione di lisi 3M sul banco di laboratorio per almeno 2 ore; incubarli in un incubatore a 37 ± 1°C per 1 ora;

oppure posizionarli in un’unità riscaldante a secco con doppio blocco per 30 secondi a 100°C.

2. Capovolgere i tubi provvisti di tappo per miscelare. Procedere con la fase successiva entro 4 ore dopo l’inversione.

3. Rimuovere il campione arricchito dall’incubatore.

3.1.1 Massaggiare delicatamente il fondo del sacchetto di arricchimento prima di trasferire il campione nel tubo

per soluzione di lisi 3M.

3.1.2 Può essere richiesto un altro campione per la ripetizione dei test o le fasi di conferma. Dopo aver raccolto il

campione, arrotolare il sacchetto per ridurre al minimo lo spazio di testa ed evitare di esporre l’arricchimento

all’aria. Se è necessaria la conferma dei risultati presunti, procedere con le fasi di conferma non appena si

ottiene il risultato presunto.

4. È necessario un tubo per soluzione di lisi 3M per ciascun campione e campione NC (Controllo Negativo) (terreno di

arricchimento sterile).

4.1 Le strisce di tubi per soluzione di lisi 3M possono essere tagliate nel numero di tubi desiderato. Selezionare il

numero necessario di tubi o strisce da 8 tubi. Posizionare i tubi per soluzione di lisi 3M in una rastrelliera vuota.

4.2 Al ne di evitare la contaminazione crociata, stappare una striscia di tubi per soluzione di lisi 3M alla volta e

utilizzare una nuova punta di pipetta per ciascuna fase di trasferimento.

4.3 Trasferire il campione arricchito nei tubi per soluzione di lisi 3M come descritto di seguito:

Trasferire innanzitutto ciascun campione arricchito in un tubo per soluzione di lisi 3M singolo. Trasferire l’NC

perultimo.

4.4 Utilizzare lo Strumento di inserimento/rimozione del tappo per il rilevamento molecolare 3M™ - Lisi per rimuovere

il tappo da una striscia di tubi per soluzione di lisi 3M, una striscia alla volta.

4.5 Gettare via il tappo del tubo per soluzione di lisi 3M; se il lisato viene conservato per eettuare nuovamente il test,

posizionare i tappi in un contenitore pulito per consentirne nuovamente l’applicazione dopo la lisi.

4.5.1 Per l’elaborazione del lisato conservato, consultare l’Appendice A.

4.6 Trasferire 20µl di campione in un tubo per soluzione di lisi 3M.

(Italiano)

IT

43

5. Ripetere i punti da 4.4 a 4.6 n quando è necessario, per il numero di campioni da testare.

20 µl

6. Quando tutti i campioni sono stati trasferiti, trasferire 20μl di NC (terreno di arricchimento sterile, ad esempio BPW) in

un tubo per soluzione di lisi 3M. Non utilizzare l’acqua come NC.

7. Vericare che la temperatura dell’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M sia

a 100 ± 1°C.

8. Posizionare la rastrelliera per tubi per soluzione di lisi 3M, scoperta, nell’Inserto del blocco di calore per il sistema di

rilevamento molecolare 3M e riscaldare per 15 ± 1 minuti. Durante il riscaldamento, la soluzione di lisi 3M virerà dal

rosa (freddo) al giallo (caldo).

8.1 I campioni non correttamente trattati termicamente durante la fase di lisi dell’analisi possono essere considerati un

potenziale rischio biologico e NON devono essere inseriti nello Strumento per l’analisi molecolare 3M.

9. Rimuovere la rastrelliera dei tubi per soluzione di lisi 3M senza coperchio dal Blocco riscaldante per il sistema di

rilevamento molecolare 3M e far rareddare nel supporto per il Blocco di rareddamento estraibile per il sistema

di rilevamento molecolare 3M per almeno 5 minuti e per un massimo di 10 minuti. Il supporto per il Blocco di

rareddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M, utilizzato a temperatura ambiente senza il

Vassoio per Blocco di rareddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M™, deve essere posto

direttamente sul banco del laboratorio. Quando è fredda, la soluzione di lisi 3M torna a essere di colore rosa.

10. Rimuovere la rastrelliera dei tubi per soluzione di lisi 3M dal supporto per il Blocco di rareddamento estraibile per il

sistema di rilevamento molecolare 3M.

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplicazione

1. È richiesto un tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter

per ciascun campione e per l’NC.

1.1 Le strisce dei tubi possono essere tagliate nel numero di tubi desiderati. Selezionare il numero necessario di tubi

di reagente singoli o di strisce da 8 tubi per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di

Campylobacter.

1.2 Posizionare i tubi in una rastrelliera vuota.

1.3 Evitare di spostare le pastiglie di reagente poste sul fondo dei tubi.

2. Selezionare un tubo di Controllo reagente 3M e posizionarlo nella rastrelliera.

3. Al ne di evitare la contaminazione crociata, rimuovere i tappi da una striscia di tubi di reagente per l’Analisi molecolare

di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter alla volta e utilizzare un nuovo puntale per pipetta per

ciascuna fase di trasferimento.

4. Trasferire ciascuno dei lisati in un tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il

rilevamento di Campylobacter e un tubo di Controllo reagente 3M come indicato di seguito:

Trasferire innanzitutto ciascun lisato campione nei tubi di reagente singoli per l’Analisi molecolare di seconda

generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter, quindi trasferire l’NC. Idratare il tubo di Controllo reagente

3Mperultimo.

(Italiano)

IT

44

5. Utilizzare lo Strumento di inserimento/rimozione del tappo per il rilevamento molecolare 3M™ - Reagente per

rimuovere il tappo da un tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di

Campylobacter; una striscia di tubi per volta. Gettare il tappo.

5.1 Trasferire 20μl di lisato campione dalla metà superiore del liquido (evitare il deposito) di un tubo per soluzione

di lisi 3M nel corrispondente tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il

rilevamento di

Campylobacter

. Erogare con un’inclinazione per evitare il movimento delle pastiglie. Miscelare

pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.

5.2 Ripetere il punto 5.1 nché ciascun lisato campione non è stato aggiunto al corrispondente tubo di reagente per

l’analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter nella striscia.

5.3 Chiudere i tubi di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di

Campylobacter con i tappi supplementari forniti e utilizzare il lato arrotondato dello Strumento di

inserimento/rimozione del tappo per il rilevamento molecolare 3M - Reagente per applicare pressione con un

movimento in avanti e all’indietro assicurandosi di stringere bene il tappo.

5.4 Ripetere i punti da 5.1 a 5.3 n quando è necessario, per il numero di campioni da testare.

5.5 Quando tutti i lisati sono stati trasferiti, ripetere i punti da 5.1 a 5.3 per trasferire 20µl di lisato NC in un tubo di

reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter.

5.6 Trasferire 20 µl di lisato NC in un tubo di Controllo reagente 3M. Erogare con un’inclinazione per evitare il

movimento delle pastiglie. Miscelare pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.

6. Caricare i tubi provvisti di tappo su un Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare

3M pulito e decontaminato. Chiudere saldamente il coperchio del Vassoio per caricamento rapido per il sistema di

rilevamento molecolare 3M.

20 µL

7. Controllare e confermare l’analisi congurata sul Software per l’analisi molecolare 3M.

8. Fare clic sul pulsante Start nel software e selezionare lo strumento da utilizzare. Il coperchio dello strumento

selezionato si apre automaticamente.

9. Posizionare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M nello Strumento per l’analisi

molecolare 3M e chiudere il coperchio per avviare l’analisi. I risultati sono forniti entro 60 minuti, sebbene quelli

positivi possano essere rilevati prima.

10. Una volta completata l’analisi, rimuovere il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare

3M dallo Strumento per l’analisi molecolare 3M e smaltire i tubi immergendoli in una soluzione di candeggina per uso

domestico 1-5% (diluita con acqua v:v) per 1 ora e lontano dall’area di preparazione dell’analisi.

AVVISO: per ridurre il rischio di falsi positivi dovuti alla contaminazione crociata, non aprire mai i tubi di reagente

contenenti DNA amplicato. Questi includono i tubi di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per

il rilevamento di Campylobacter, i tubi di Controllo reagente 3M e i tubi di Controllo della matrice 3M. Smaltire sempre

provette di reagente sigillate immergendole in una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita con acqua

v:v) per un’ora e fuori dall’area di preparazione dell’analisi.

Risultati e interpretazione

Un algoritmo interpreta la curva di emissione luminosa risultante dal rilevamento dell’amplicazione degli acidi nucleici.

Irisultati sono analizzati automaticamente dal software e codicati mediante un colore in base all’esito. Un risultato

positivo o negativo è determinato dall’analisi di un numero di parametri unici della curva. I risultati presunti positivi sono

riportati in tempo reale mentre i risultati Negativi e Da esaminare sono visualizzati al completamento dell’analisi.

I risultati presunti positivi vanno confermati in base alle procedure operative standard del laboratorio o seguendo

un metodo di conferma appropriato

(1,2)

, iniziando dal trasferimento dall’arricchimento del Brodo di arricchimento

3MperCampylobacter a piastre selettive di Campylobacter con incubazione microaerola, dalla conferma degli isolati

utilizzando metodi biochimici e sierologici adeguati. Per mantenere al meglio l’arricchimento, arrotolare il sacchetto

dell’arricchimento dopo la raccolta del campione.

(Italiano)

IT

45

NOTA: anche un campione negativo non fornirà una lettura zero poiché il sistema e i reagenti di amplicazione

dell’Analisi molecolare di seconda generazione 3M per il rilevamento di Campylobacter riportano un valore di

“background” dell’unità di luce relativa (RLU).

Nel raro caso di emissione luminosa insolita, l’algoritmo la classica come Da esaminare. 3M consiglia all’utente di ripetere

l’analisi per qualsiasi campione da esaminare. Se il risultato continua a essere Da esaminare, procedere con il test di

conferma utilizzando il proprio metodo di elezione o come specicato dalle normative locali

(1,2)

.

Appendice A. Interruzione del protocollo: Conservazione e nuovo test dei lisati termotrattati

1. Per conservare un lisato termotrattato, richiudere il tubo per soluzione di lisi 3M con un tappo pulito (vedere la

sezioneLisi, 4.5)

2. Conservare a 2-8°C no a 72 ore.

3. Preparare il campione conservato per l’amplicazione capovolgendolo 2-3 volte per miscelarlo.

4. Togliere il tappo ai tubi.

5. Collocare i tubi di lisato miscelato sull’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare

3Meriscaldare a 100 ± 1°C per 5 ± 1 minuti.

6. Rimuovere la rastrelliera dei tubi per soluzione di lisi 3M dal Blocco riscaldante per il sistema di rilevamento molecolare

3M e far rareddare nel supporto per il Blocco di rareddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare

3M per almeno 5minuti e per un massimo di 10 minuti.

7. Continuare il protocollo indicato nella sezione Amplicazione illustrata sopra.

Bibliograa:

1. Microbiology Laboratory Guidebook. U. S. Department of Agriculture (USDA) Food Safety and Inspection Service

(FSIS) Microbiology Laboratory guidebook 41.04. Isolation and identication of Campylobacter jejuni/coli/lari from

poultry rinse, sponge and raw product samples. August 1, 2016.

2. ISO 10272-1. Microbiology of the food chain - Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter

spp. Part 1. Detection method.

3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice for

Nonclinical Laboratory Studies.

4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus - General rules for microbiological examination.

6. 3M Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular

Detection System. Contact your 3M Food Safety representative to obtain a copy of this document.

7. ISO 11133. Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of

culture media.

8. U. S. Department of Agriculture (USDA). Food Safety and Inspection Service (FSIS) Directive 10, 250.1. Salmonella and

Campylobacter verication program for raw meat and poultry products. September 20, 2013.

Legenda dei simboli

www.3M.com/foodsafety/symbols

(Italiano)

IT

La pagina sta caricando ...

3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Istruzioni per l'uso

3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Istruzioni per l'uso

in altre lingue

Documenti correlati

Altri documenti