Thermo Fisher Scientific VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit Istruzioni per l'uso

Marca: Thermo Fisher Scientific

Modello: VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit

Tipo: Istruzioni per l'uso

VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit

Per la preparazione di acidi nucleici mediante lisi rapida da impiegare in PCR

Numero di catalogo FLK

N. di pub. MAN0010636 Rev. D.0

AVVERTENZA! Leggere le schede di sicurezza (SDS) e seguire le istruzioni relative alla manipolazione. Indossare occhiali,

indumenti e guanti di protezione adeguati. Le Scheda di sicurezza (SDS) sono disponibili all’indirizzo thermoﬁsher.com/support.

Descrizione del prodotto

Il Applied Biosystems™ VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit utilizza una lisi rapida per estrarre l'acido nucleico da impiegare in PCR Real-

Time senza necessità di ulteriore puricazione.

Per istruzioni dettagliate sull’uso del VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit con kit compatibili VetMAX™ PCR Real-Time, contattare il

Supporto Tecnico.

Contenuto e conservazione

Tabella 1 VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit (n. di cat. FLK, 200 reazioni)

Contenuto Quantità

Conservazione

Alla ricezione Dopo il primo utilizzo

6a - Fast Lysis Concentrate (30X) (provetta arancione) 4 × 500 µL Da -30 °C a -10 °C Da -30 °C a -10 °C

6b - Fast Lysis Diluent Buffer (ﬂaconcino bianco) 2 × 30 mL Da 2 °C a 8 °C

Materiali richiesti ma non forniti

Se non diversamente indicato, tutti i materiali sono disponibili su thermoﬁsher.com. MLS: Fisher Scientic (ﬁsherscientiﬁc.com) o altri

principali fornitori per laboratori.

Articolo Fonte

Mixer da laboratorio, vortex o equivalente MLS

Incubatore o scaldaprovette impostato a 95 °C[1] MLS

Due incubatori o scaldaprovette impostati a 70 °C e 90 °C[2] MLS

Micropipette regolabili (1–1.000 µL) dotate di puntali con ﬁltro privi di DNAsi/RNAsi MLS

Microprovette (compatibili con l'incubatore o lo scaldaprovette utilizzato) MLS

Acqua priva di nucleasi (non trattata con DEPC) AM9938

[1] Richiesto per il flusso di lavoro con riscaldamento a un passaggio.

[2] Richiesti per il flusso di lavoro con riscaldamento a due passaggi.

ISTRUZIONI PER L'USO

Per utilizzo in laboratorio.

Linee guida procedurali

Linee guida per l’introduzione del campione

Tipo di campione Procedura

Biopsia di orecchio Aggiungere la Fast Lysis Solution (FLS) direttamente nella provetta

contenente il tessuto.

External positive control (EPC) (fornito nei VetMAX™ kit di Real-Time PCR) Per il volume da introdurre, vedere le Istruzioni per l’uso del kit VetMAX™.

Opzioni per la lisi dei campioni

Per la lisi rapida delle biopsie dell’orecchio con VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit sono disponibili due opzioni.

•Flusso di lavoro con riscaldamento a un passaggio—Richiede un passaggio di riscaldamento a 95 °C per 10 minuti.

•Flusso di lavoro con riscaldamento a due passaggi—Richiede due passaggi di riscaldamento: 70 °C per 30 minuti e 90 °C per 10

minuti.

Preparazione della Fast Lysis Solution (FLS)

1. Combinare i seguenti componenti per il numero di campioni richiesto aggiungendo un 10% di eccesso.

Utilizzare la FLS lo stesso giorno in cui è stata preparata.

Componente Volume per 1 campione Volume per N campioni

6a - Fast Lysis Concentrate (30X) 10 µL N × 10 µL

6b - Fast Lysis Diluent Buffer 290 µL N × 290 µL

FLS totale 300 µL N × 300 µL

2. Procedere con il usso di lavoro appropriato per il proprio laboratorio.

•Flusso di lavoro con riscaldamento a un passaggio—Vedere “Lisare i campioni utilizzando il usso di lavoro con

riscaldamento a un passaggio” a pagina 2.

•Flusso di lavoro con riscaldamento a due passaggi—Vedere “Lisare i campioni utilizzando il usso di lavoro con

riscaldamento a due passaggi” a pagina 3.

Lisare i campioni utilizzando il ﬂusso di lavoro con riscaldamento a un passaggio

1. Preriscaldare uno scaldaprovette o un incubatore a 95 °C.

2. Combinare la FLS con ciascun campione o controllo come indicato nella tabella seguente.

Nota: Assicurarsi che l’intera biopsia dell’orecchio sia a contatto con la FLS.

Tipo di campione Campione del test FLS

Campione o EPC Vedere “Linee guida per l’introduzione del campione” a pagina 2 300 µL

Controllo negativo (NCS) — 300 µL

3. (Opzionale) Agitare immediatamente ogni campione per 15 secondi mediante agitatore vortex.

In alternativa, immergere ogni biopsia dell’orecchio in FLS, quindi pipettare la FLS sul campione.

4. Incubare i campioni a 95 °C per 10 minuti.

5. Raffreddare i lisati ponendoli a −20 °C o a 2−8 °C per 10 minuti per prevenire la contaminazione crociata durante le PCR Real-Time.

6. (Opzionale) Centrifugare i lisati a 4.000 × g per 1 minuto.

Il lisato è pronto per la PCR Real-Time usando un kit VetMAX™ compatibile.

• Conservare il lisato in ghiaccio o a 2–8 °C per un massimo di 6 ore, oppure al di sotto di −16 °C per la conservazione a lungo

termine.

2VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit Istruzioni per l’uso

• Effettuare la PCR Real-Time utilizzando 5 µL di lisato.

Lisare i campioni utilizzando il ﬂusso di lavoro con riscaldamento a due passaggi

1. Preriscaldare due scaldaprovette o incubatori a 70 °C e 90 °C.

2. Combinare la FLS con ciascun campione o controllo come indicato nella tabella seguente.

Nota: Assicurarsi che l’intera biopsia dell’orecchio sia a contatto con la FLS.

Tipo di campione Campione del test FLS

Campione o EPC Vedere “Linee guida per l’introduzione del campione” a pagina 2 300 µL

Controllo negativo (NCS) — 300 µL

3. (Opzionale) Agitare immediatamente ogni campione per 15 secondi mediante agitatore vortex.

In alternativa, immergere ogni biopsia dell’orecchio in FLS, quindi pipettare la FLS sul campione.

4. Incubare i campioni a 70 °C per 30 minuti.

IMPORTANTE! È fondamentale che i campioni raggiungano la temperatura di 70 °C il più rapidamente possibile. Se si usa un

incubatore, assicurarsi che la distanza tra le provette sia adeguata per consentire un usso d’aria sufciente.

5. Trasferire rapidamente i campioni in un incubatore o in uno scaldaprovette preriscaldato a 90 °C, quindi incubare per 10 minuti.

Non lasciare che le provette si raffreddino durante il trasferimento.

6. Effettuare una delle seguenti procedure per prevenire la contaminazione crociata durante la Real-Time RT-PCR.

• Raffreddare i lisati mettendoli a 2–8 °C per 5 minuti.

• Centrifugare i lisati a 4.000 × g per 1 minuto.

Il lisato è pronto per la PCR Real-Time usando un kit VetMAX™ compatibile.

• Conservare il lisato in ghiaccio o a 2–8 °C per un uso immediato, oppure al di sotto di −16 °C per un massimo di 6 mesi.

• Effettuare la PCR Real-Time utilizzando 5 µL di lisato.

Garanzia limitata del prodotto

Life Technologies Corporation e/o i suoi afliati garantiscono i loro prodotti come indicato nel documento Termini generali e condizioni di

vendita di Life Technologies disponibile all’indirizzo www.thermoﬁsher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions.html. In caso di

domande, contattare Life Technologies all'indirizzo www.thermoﬁsher.com/support.

Laboratoire Service International (LSI) | 6 Allée des Ecureuils – Parc Tertiaire du Bois-Dieu | 69380 Lissieu – France

Per le descrizioni dei simboli sulle etichette o nella documentazione di prodotto, consultare thermoﬁsher.com/symbols-deﬁnition.

Le informazioni contenute in questa guida sono soggette a modiﬁche senza preavviso.

ESONERO DI RESPONSABILITÀ: NELLA MISURA CONSENTITA DALLA LEGGE, THERMO FISHER SCIENTIFIC INC. E/O LA/E SUA/E AFFILIATA/E NON SARANNO RESPONSABILI

PER DANNI SPECIALI, INCIDENTALI, INDIRETTI, PUNITIVI, MULTIPLI O CONSEGUENTI CONNESSI O DERIVANTI DA QUESTO DOCUMENTO, TRA CUI L'UTILIZZO DELLO STESSO.

Tradotto dalla pubblicazione in lingua inglese numero MAN0009603 Rev. C.0.

Cronologia delle revisioni: N. di pub. MAN0009603

Revisione Data Descrizione

C.0 17 marzo 2020 Aggiunta del ﬂusso di lavoro con riscaldamento a un passaggio che richiede un solo passaggio di riscaldamento.

B.0 2 ottobre 2019

•Modiﬁca del nome del prodotto da MagMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit a VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit.

• Aggiornate le informazioni sulla autorizzazione limitata.

A.0 8 marzo 2017 Aggiornato all'attuale modulo con relativi aggiornamenti sulla garanzia, sui marchi registrati e sui loghi.

1.0 11 ottobre 2013 Riferimento per la cronologia delle revisioni.

Importanti informazioni sulla licenza: Questi prodotti possono essere coperti da uno o più licenze con limitazioni d’uso. Con l’utilizzo di questi prodotti, si accettano i termini e le

condizioni di tutte le licenze con limitazioni d’uso applicabili.

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19 Marzo 2020