Thermo Fisher Scientific Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Manuale del proprietario

Applied Biosystems StepOne™

Real-Time PCR System

Esperimenti con curva standard relativa e CTcomparativo

Guida introduttiva

Applied Biosystems StepOne™

Real-Time PCR System

Esperimenti con curva standard relativa e CT comparativo

Introduzione

Disegno

dell'esperimento

con curva

standard relativa

Preparazione delle

reazioni con curva

standard relativa

Esecuzione

dell'esperimento

con curva standard

relativa

Analisi

dell'esperimento

con curva

standard relativa

Disegno

dell'esperimento

con CT comparativo

Preparazione delle

reazioni con CT

comparativo

Esecuzione

dell'esperimento

con CT comparativo

Analisi

dell'esperimento

CT comparativo

Guida introduttiva

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

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The StepOne™ Real-Time PCR System is covered by US patents and corresponding claims in their non-US counterparts, owned by Applied Biosystems. No

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trademarks of Applied Biosystems o le sue società controllate negli U.S.A. e/o altri paesi.

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SYBR is a registered trademark of Molecular Probes, Inc.

Macintosh is a registered trademark of Apple Computer, Inc.

Microsoft and Windows are registered trademarks of Microsoft Corporation.

All other trademarks are the sole property of their respective owners.

N. di cat. 4377741 Rev. B

06/2010

Indice

iii

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

CONFIDENTIAL — For AB Internal Use Only. Do Not Distribute.

Premessa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii

Come utilizzare questa guida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii

Come ottenere ulteriori informazioni . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . viii

Come ottenere assistenza . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . x

Convenzioni sulla sicurezza utilizzate in questo documento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xi

Simboli sugli strumenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xiii

Etichette di sicurezza sugli strumenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xv

Sicurezza generale dello strumento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvi

Sicurezza dalle sostanze chimiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvii

Sicurezza dei rifiuti chimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xix

Sicurezza elettrica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xx

Sicurezza LED . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxi

Sicurezza rischio biologico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxi

Sicurezza della stazione di lavoro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxii

Norme di sicurezza e di compatibilità elettromagnetica (EMC) . . . . . . . . . . . . . . . . xxiii

Capitolo 1 Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1

Informazioni sul sistema StepOne™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Informazioni sugli esperimenti con curva standard relativa e con CT comparativo . . . . 4

Come utilizzare questa guida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

Informazioni sull'esperimento di esempio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

Flusso di lavoro dell'esperimento di esempio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

Capitolo 2 Disegno dell'esperimento con curva standard

relativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Creazione di un nuovo esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17

Definizione delle proprietà dell'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

Definizione dei metodi e dei materiali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

Impostazione dei target . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

Impostazione degli standard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28

Impostazione dei campioni . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30

Regolazione delle impostazioni di quantificazione relativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32

Impostazione del metodo di esecuzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

Verifica dell'impostazione della reazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

CONFIDENTIAL — For AB Internal Use Only. Do Not Distribute.

iv

Ordine dei materiali per l'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43

Termine del flusso di lavoro del Design Wizard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46

Capitolo 3 Preparazione delle reazioni con curva standard

relativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50

Preparazione del templato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51

Preparazione delle diluizioni del campione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52

Preparazione delle serie di diluizioni standard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55

Preparazione della miscela di reazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58

Preparazione della piastra di reazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61

Capitolo 4 Esecuzione dell'esperimento con curva standard

relativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

Preparazione per l'esecuzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

(Opzionale) Abilitazione delle notifiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69

Avvio dell'esecuzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71

Monitoraggio dell'esecuzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 74

Disinserimento della piastra di reazione e trasferimento dei dati . . . . . . . . . . . . . . . . 83

Capitolo 5 Analisi dell'esperimento con curva standard

relativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88

Sezione 5.1: Verifica dei risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89

Analisi dell'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90

Visualizzazione della curva standard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96

Visualizzazione del plot di amplificazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99

Visualizzazione del Gene Expression Plot (Plot di espressione genica) e della

tabella Well (Pozzetto) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 104

Pubblicazione dei dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107

Sezione 5.2: Risoluzione problemi (se necessario) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 109

Visualizzazione delle impostazioni di analisi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110

Visualizzazione del riepilogo CQ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112

Omissione di pozzetti dall'analisi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114

Visualizzazione del plot multicomponente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 116

Visualizzazione del plot dati non elaborati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 118

v

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

CONFIDENTIAL — For AB Internal Use Only. Do Not Distribute.

Capitolo 6 Disegno dell'esperimento con CT comparativo . . . . 121

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122

Creazione di un nuovo esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123

Definizione delle proprietà dell'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 125

Definizione dei metodi e dei materiali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127

Impostazione dei target . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131

Impostazione dei campioni . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 133

Regolazione delle impostazioni di quantificazione relativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135

Impostazione del metodo di esecuzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 136

VerificaVerifica dell'impostazione della reazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138

Ordine dei materiali per l'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143

Termine del flusso di lavoro del Design Wizard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147

Capitolo 7 Preparazione delle reazioni con CT comparativo . . . 151

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 152

Preparazione del templato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 153

Preparazione delle diluizioni del campione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154

Preparazione della miscela di reazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 156

Preparazione della piastra di reazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159

Capitolo 8 Esecuzione dell'esperimento con CT

comparativo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 163

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 164

Preparazione per l'esecuzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 165

Esecuzione dell'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 167

Capitolo 9 Analisi dell'esperimento CT comparativo . . . . . . . . . 169

Descrizione generale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 170

Sezione 9.1: Verifica dei risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171

Analisi dell'esperimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172

Visualizzazione del Gene Expression Plot (Plot di espressione genica) e della

tabella Well (Pozzetto) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 177

Visualizzazione del plot di amplificazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 181

Pubblicazione dei dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 186

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

CONFIDENTIAL — For AB Internal Use Only. Do Not Distribute.

vi

Sezione 9.2: Risoluzione problemi (se necessario) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 187

Visualizzazione delle impostazioni di analisi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 188

Visualizzazione del riepilogo CQ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 190

Omissione di pozzetti dall'analisi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 193

Visualizzazione del plot multicomponente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 195

Visualizzazione del plot dati non elaborati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 197

Appendice A Ulteriori flussi di lavoro degli esperimenti . . . . . . . . . . . 199

Flusso di lavoro impostazione avanzata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 200

Flusso di lavoro avvio rapido . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 201

Flusso di lavoro del templato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 202

Flusso di lavoro esportazione/importazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 203

Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 205

Glossario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207

Indice. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 221

vii

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

Premessa

Come utilizzare questa guida

Scopo della guida Questa guida spiega come eseguire esperimenti con curva standard relativa e con CT

(∆∆CT) comparativo sul sistema PCR Real-Time StepOne™ Applied Biosystems

(sistema StepOne™). Questa guida funge da:

• Tutorial, utilizzando i dati dell'esperimento di esempio in dotazione con il software

del sistema PCR Real-Time StepOne™ di Applied Biosystems (software

StepOne™).

• Guida, per i propri esperimenti.

A chi si rivolge Questa guida è pubblicata per il personale di laboratorio e per i ricercatori principali che

eseguono esperimenti con curva standard relativa e/o con CT comparativo utilizzando il

sistema StepOne.

Ipotesi assunte La guida prevede che l'utente:

• Abbia conoscenze sull'utilizzo del sistema operativo Microsoft Windows® XP.

• Abbia conoscenze sull'utilizzo di Internet e sui browser di navigazione in Internet.

• Conosca le modalità di manipolazione dei campioni DNA e/o RNA e della loro

preparazione per la PCR.

• Abbia dimestichezza con la memorizzazione dei dati, il trasferimento di file e le

funzioni di copia e incolla.

• Abbia esperienza di collegamenti in rete, nel caso sia prevista l'integrazione del

sistema StepOne nel flusso di lavoro preesistente del proprio laboratorio.

Convenzioni del

testo

La guida utilizza le seguenti convenzioni:

• Il testo in Grassetto indica un azione dell'utente. Ad esempio:

Digitare 0, quindi premere Enter (Invio) per ognuno dei campi rimanenti.

• Il testo in Corsivo indica parole nuove o importanti e viene utilizzato anche per

enfatizzare. Ad esempio:

Prima di un'analisi, preparare sempre matrice fresca.

• Un simbolo di freccia a destra () separa i comandi successivi selezionati da un

menu a discesa o da un menu a scelta rapida. Ad esempio:

Selezionare FileOpen (Apri).

Premessa

Come ottenere ulteriori informazioni

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

viii

Messaggi di

attenzione per

l'utente

Nella documentazione per l'utente Applied Biosystems compaiono due tipi di messaggi

di attenzione. Ciascun messaggio presuppone un particolare livello di osservanza o

l'esecuzione di una particolare operazione da parte dell'utente, secondo quanto descritto

qui di seguito:

Nota: – Fornisce informazioni che potrebbero essere di interesse o di aiuto ma non di

importanza critica per l'uso del prodotto.

IMPORTANTE! – Fornisce informazioni necessarie per il corretto funzionamento dello

strumento, per l'uso accurato del kit reagenti o per l'uso sicuro di un prodotto chimico.

Alcuni esempi dei messaggi di attenzione sono indicati qui di seguito:

Nota: La funzione Calibrate (Calibra) è anche disponibile nella Control Console

(Console di comando)

IMPORTANTE! Per verificare la propria connessione client, è necessario un ID utente

valido.

Messaggi di

sicurezza

Nella documentazione per l'utente appaiono anche Messaggi di sicurezza. Per ulteriori

informazioni, consultare “Messaggi di sicurezza” a pagina xi.

Come ottenere ulteriori informazioni

Documentazione

correlata

La documentazione seguente è allegata al sistema StepOne:

Documento n. di cat.

inglese

n. di cat.

italiano

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Getting

Started Guide for Genotyping Experiments

4376786

4377729

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Getting

Started Guide for Presence/Absence Experiments 4376787

—

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Getting

Started Guide for Relative Standard Curve and Comparative CT

Experiments

4376785

4377742

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Getting

Started Guide for Standard Curve Experiments

4376784

4377736

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Installation,

Maintenance, and Networking Guide

4376782

4377798

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Installation

Quick Reference Card

4376783

4377792

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Site

Preparation Guide

4376768

4378359

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Software

Help

—

Premessa

Come ottenere ulteriori informazioni

ix

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

La documentazione di supporto seguente è disponibile presso Applied Biosystems:

Nota: Per ulteriori documentazioni, consultare “Come ottenere assistenza” a pagina x.

Informazioni dalla

Guida Software

(Help)

La voce Help (Guida) del Software StepOne descrive le modalità di utilizzo di ogni

funzione dell'interfaccia utente. Accedere alla voce Help (Guida) dal software StepOne

in uno dei modi seguenti:

• Premere F1.

• Fare clic su nella barra degli strumenti.

• Selezionare Help (Guida)StepOne Help (Guida StepOne).

Per trovare argomenti di interesse nella voce Help (Guida):

• Esaminare l'indice.

• Cercare un argomento specifico.

• Cercare un indice alfabetico.

Invio di commenti Applied Biosystems è ben lieta di ricevere i commenti e i suggerimenti dei clienti allo

scopo di migliorare la propria documentazione per l'utente. È possibile inviare commenti

per e-mail a:

[email protected]

IMPORTANTE! Utilizzare l'indirizzo e-mail sopra indicato esclusivamente per inoltrare

commenti e suggerimenti relativi alla documentazione. Per ordinare documenti,

scaricare file PDF o per aiuto su questioni tecniche, visitare il sito web all'indirizzo

http://www.appliedbiosystems.com, quindi fare clic sul link per il Supporto. (Vedere

“Come ottenere assistenza” qui di seguito).

Documento n.di cat.

Amplification Efficiency of TaqMan® Gene Expression Assays Application Note 127AP05

Applied Biosystems High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits Protocol 4375575

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Installation Performance

Verification Protocol

4376791

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Installation Qualification-

Operation Qualification Protocol

4376790

Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Planned Maintenance

Protocol

4376788

Custom TaqMan® Gene Expression Assays Protocol 4334429

Primer Express® Software Version 3.0 Getting Started Guide 4362460

TaqMan® Gene Expression Assays Protocol 4333458

User Bulletin #2: Relative Quantitation of Gene Expression 4303859

Premessa

Come ottenere assistenza

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

x

Come ottenere assistenza

Per le informazioni relative a servizi e assistenza tecnica più recenti per tutte le sedi,

visitare il sito web all'indirizzo http://www.appliedbiosystems.com, quindi fare clic sul

link Support (assistenza).

Nella pagina dell'assistenza clienti, è possibile:

• Ricercare argomenti attraverso le domande frequenti (FAQ)

• Inviare una domanda direttamente al servizio di assistenza tecnica

• Ordinare documenti per l'utente Applied Biosystems, MSDS, certificati di analisi e

altri documenti correlati

• Scaricare documenti in PDF

• Ottenere informazioni sull'addestramento del cliente

• Scaricare aggiornamenti e patch del software

Inoltre, la pagina dell'assistenza clienti fornisce l'accesso ai numeri di telefono e di fax in

tutto il mondo per contattare l'assistenza tecnica e i punti vendita Applied Biosystems.

IMPORTANTE! Contattare il Servizio clienti Applied Biosystems (Customer Care

Center) quando suggerito da questa guida o in caso di necessità per programmare le

operazioni di manutenzione (quali, manutenzione pianificata annuale o

verifica/calibrazione della temperatura) per il proprio strumento StepOne™. Per ottenere

un numero di telefono o un indirizzo e-mail del centro, andare su

http://www.appliedbiosystems.com/support/contact.

Premessa

Convenzioni sulla sicurezza utilizzate in questo documento

xi

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

Convenzioni sulla sicurezza utilizzate in questo documento

Messaggi di

sicurezza

Nella documentazione per l'utente di Applied Biosystems appaiono quattro diversi

messaggi di attenzione in punti del documento dove risulta necessario essere ben

consapevoli della possibilità di pericoli rilevanti. Ciascun messaggio—IMPORTANTE,

ATTENZIONE, AVVERTENZA, PERICOLO—presuppone un particolare livello di

osservanza o l'esecuzione di una particolare operazione da parte dell'utente, secondo

quanto descritto qui di seguito.

Definizioni

IMPORTANTE! – Indica informazioni necessarie per il corretto funzionamento dello

strumento, per l'uso accurato del kit reagenti o per l'uso sicuro di un prodotto chimico.

– Indica una situazione potenzialmente pericolosa che, se non evitata,

potrebbe causare lesioni di minore o moderata entità. Può inoltre essere utilizzata per

mettere in guardia l'utente nei confronti di pratiche non sicure.

– Indica una situazione potenzialmente pericolosa che, se non

evitata, potrebbe causare lesioni gravi o morte.

– Indica una situazione di pericolo incombente che, se non evitata,

causerà morte o lesioni gravi. Questo messaggio viene utilizzato esclusivamente nelle

situazioni di estremo pericolo.

Ad eccezione di IMPORTANTE, ogni messaggio di sicurezza in un documento

Applied Biosystems appare accanto a un figura di triangolo aperto contenente un

simbolo di pericolo. Questi simboli di pericolo sono identici a quelli posizionati sugli

strumenti Applied Biosystems (vedere “Simboli di sicurezza” a pagina xiii).

Premessa

Convenzioni sulla sicurezza utilizzate in questo documento

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curva standard relativa e CT comparativo

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xii

Esempi

IMPORTANTE! Creare un foglio elettronico separato di immissione campioni per ogni

piastra a 96-pozzetti.

PERICOLO CHIMICO. TaqMa n® Universal PCR Master Mix

può provocare irritazione degli occhi e della pelle. L'esposizione può provocare problemi

in caso di ingestione o inalazione. Leggere le MSDS e attenersi rigorosamente alle

istruzioni relative alla manipolazione di questa sostanza. Indossare un'adeguata

protezione oculare, indumenti e guanti di protezione.

PERICOLO DI INFORTUNIO. Durante il funzionamento dello

strumento, il pannello di copertura e il blocco campione riscaldato possono raggiungere

temperature che superano anche i 100 °C.

PERICOLO ELETTRICO. La continuità del circuito di messa a

terra è vitale per il funzionamento in sicurezza. Non mettere mai in funzione il sistema

con il conduttore di messa a terra scollegato.

Premessa

Simboli sugli strumenti

xiii

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curva standard relativa e CT comparativo

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Simboli sugli strumenti

Simboli elettrici

sugli strumenti

La seguente tabella descrive i simboli elettrici che potrebbero essere visualizzati sugli

strumenti Applied Biosystems.

Simboli di

sicurezza

La seguente tabella descrive i simboli di sicurezza che potrebbero essere visualizzati

sugli strumenti Applied Biosystems. Ogni simbolo potrebbe apparire da solo o con un

testo che spieghi il pericolo rilevante (vedere “Etichette di sicurezza sugli strumenti” a

pagina xv). Questi simboli di sicurezza potrebbero inoltre apparire vicino alle

indicazioni di PERICOLO, AVVERTENZA e ATTENZIONE riscontrabili nel testo dei

documenti di supporto-di questo e di altri prodotti.

Simbolo Descrizione Simbolo Descrizione

Indica che l'interruttore di

alimentazione

dell'apparecchiatura è in

posizione On (Acceso).

Indica che un terminale può

essere collegato alla messa a

terra di un altro strumento. Non si

tratta di un terminale di terra

protetto.

Indica che l'interruttore di

alimentazione

dell'apparecchiatura è in

posizione Off (Spento).

Indica un terminale di terra

protetto che va collegato a terra

prima di eseguire qualsiasi altro

collegamento elettrico

all'apparecchiatura.

Indica un interruttore di

standby mediante il quale lo

strumento viene commutato in

una condizione di Standby. Se

questo interruttore si trova in

standby, potrebbe svilupparsi

una tensione pericolosa.

Indica un terminale che può

ricevere o erogare corrente o

tensione alternata.

Indica le posizioni On/Off

(Acceso/Spento)

dell'interruttore di

alimentazione a pulsante

dell'apparecchiatura.

Indica un terminale che può

ricevere o erogare corrente o

tensione continua.

Simbolo Descrizione Simbolo Descrizione

Rimanda alla consultazione del

manuale per ottenere ulteriori

informazioni e chiede all'utente

di procedere con la giusta

cautela.

Indica la presenza di parti in

movimento e chiede all'utente di

procedere con la giusta cautela.

Indica la presenza di pericolo di

folgorazione e chiede all'utente di

procedere con la giusta cautela.

Indica la presenza pericolosa di

superfici calde o di altre

condizioni di alta-temperatura e

chiede all'utente di procedere

con la giusta cautela.

Indica la presenza di un laser

all'interno dello strumento e

chiede all'utente di procedere con

la giusta cautela.

Premessa

Simboli sugli strumenti

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curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

xiv

Simboli

ambientali

sugli strumenti

I seguenti simboli sono applicabili a tutti i prodotti elettrici ed elettronici

Applied Biosystems presenti sul mercato europeo dopo il 13 agosto 2005.

Simbolo Descrizione

Non eseguire lo smaltimento di questo prodotto come rifiuto urbano

indifferenziato. Seguire le ordinanze locali per i rifiuti urbani per uno smaltimento

corretto, allo scopo di ridurre l'impatto ambientale delle apparecchiature elettriche

ed elettroniche fuori uso (WEEE).

Clienti dell'Unione europea:

Contattare l'ufficio di Assistenza Clienti Applied Biosystems locale per la raccolta e

il riciclo dell'apparecchiatura. Consultare il sito web

http://www.appliedbiosystems.com per un elenco degli uffici di Assistenza

Clienti presenti nell'Unione europea.

Premessa

Etichette di sicurezza sugli strumenti

xv

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

curva standard relativa e CT comparativo

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Etichette di sicurezza sugli strumenti

Le seguenti dichiarazioni di ATTENZIONE, AVVERTENZA e PERICOLO potrebbero

essere visualizzabili sugli strumenti Applied Biosystems in combinazione con i simboli

di sicurezza descritti nella sessione precedente.

Posizione delle

avvertenze

Il sistema StepOne presenta un'avvertenza nella posizione indicata qui di seguito:

Inglese Francese

CAUTION Hazardous chemicals. Read the

Material Safety Data Sheets (MSDSs) before

handling.

ATTENTION Produits chimiques dangeureux.

Lire les fiches techniques de sûreté de

matériels avant la manipulation des produits.

CAUTION Hazardous waste. Refer to

MSDS(s) and local regulations for handling

and disposal.

ATTENTION Déchets dangereux. Lire les

fiches techniques de sûreté de matériels et la

régulation locale associées à la manipulation

et l'élimination des déchets.

CAUTION Hot surface. ATTENTION Surface brûlante.

DANGER High voltage. DANGER Haute tension.

WARNING To reduce the chance of electrical

shock, do not remove covers that require tool

access. No user-serviceable parts are inside.

Refer servicing to Applied Biosystems

qualified service personnel.

AVERTISSEMENT Pour éviter les risques

d'électrocution, ne pas retirer les capots dont

l'ouverture nécessite l'utilisation d'outils.

L’instrument ne contient aucune pièce

réparable par l’utilisateur. Toute intervention

doit être effectuée par le personnel de service

qualifié de Applied Biosystems.

CAUTION Moving parts. ATTENTION Parties mobiles.

DANGER Class 3B (III) visible and/or invisible

LED radiation present when open and

interlocks defeated. Avoid exposure to beam.

DANGER Rayonnement visible ou invisible

d’un faisceau LED de Classe 3B (III) en cas

d’ouverture et de neutralisation des

dispositifs de sécurité. Evitez toute

exposition au faisceau.

Premessa

Sicurezza generale dello strumento

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xvi

Sicurezza generale dello strumento

PERICOLO DI INFORTUNIO. Utilizzando lo strumento in un

modo non specificato da Applied Biosystems potrebbero verificarsi lesioni personali o

danni allo strumento.

Spostamento e

sollevamento

dello strumento

PERICOLO DI INFORTUNIO. Lo strumento deve essere spostato

e posizionato esclusivamente dal personale o del venditore specificato nella guida

corrispondente di preparazione della sede. In caso di sollevamento o di spostamento

dello strumento dopo lo sua avvenuta installazione, non tentare di sollevare o di spostare

lo strumento senza l'assistenza di terzi, l'uso di una idonea apparecchiatura per lo

spostamento e tecniche corrette di sollevamento. Il sollevamento senza le opportune

precauzioni può provocare traumi dorsali dolorosi e permanenti. A seconda del peso, lo

spostamento o il sollevamento di uno strumento può richiedere la presenza di due o più

persone.

Spostamento e

sollevamento dei

computer e

monitor

indipendenti

Non tentare di sollevare o di spostare il computer o il monitor senza

l'assistenza di terzi. A seconda del peso del computer e/o del monitor, il loro

spostamento può richiedere la presenza di due o più persone.

Considerazioni prima del sollevamento del computer e/o del monitor:

• Accertarsi di avere una presa comoda e sicura sul computer o sul monitor durante il

sollevamento.

• Accertarsi che il percorso di spostamento dal punto di partenza al punto di arrivo sia

libero da eventuali ostacoli.

• Non sollevare un oggetto e contemporaneamente ruotare il busto.

• Mantenere la colonna vertebrale in una corretta posizione neutra mentre si esegue il

sollevamento con le gambe.

• I partecipanti devono coordinare le proprie azioni di sollevamento e spostamento

prima di cominciare il trasporto.

• Invece di sollevare l'oggetto dalla confezione, ribaltare con attenzione la scatola su

un lato e reggerla mentre qualcun altro fa scivolare il contenuto al di fuori di essa.

Messa in funzione

dello strumento

Accertarsi che chiunque utilizzi lo strumento abbia:

• Ricevuto tutte le istruzioni sulle pratiche di sicurezza generali per i laboratori e su

quelle specifiche per lo strumento.

• Letto con attenzione tutte le informazioni contenute in tutte le MSDS pertinenti.

Vedere “Schede di sicurezza dei materiali” a pagina xviii.

Pulizia o

decontaminazione

dello strumento

Prima di utilizzare un metodo di pulizia o di decontaminazione

diverso da quelli raccomandati dalla ditta produttrice, verificare con la ditta stessa che il

metodo proposto non danneggerà l'apparecchiatura.

Premessa

Sicurezza dalle sostanze chimiche

xvii

Guida introduttiva del sistema Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System per gli esperimenti con

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Sicurezza dalle sostanze chimiche

Avvertenze

relative alle

sostanze

chimiche

pericolose

PERICOLO CHIMICO. Prima di manipolare eventuali sostanze

chimiche, fare riferimento alle MSDS fornite dalla ditta produttrice e osservare tutte le

relative precauzioni.

PERICOLO STOCCAGGIO CHIMICO. Non raccogliere o

riporre mai i rifiuti chimici in contenitori di vetro, che potrebbero incrinarsi o

frantumarsi. I flaconi dei reagenti e delle sostanze chimiche di rifiuto possono essere

soggetti a incrinature e a perdite. Tutti i flaconi contenenti sostanze di rifiuto vanno posti

in contenitori di sicurezza in polietilene a bassa densità, con il coperchio ben chiuso e le

maniglie bloccate in posizione verticale. Durante la manipolazione dei flaconi dei

reagenti e delle sostanze chimiche di rifiuto, indossare occhiali di protezione, guanti e

indumenti protettivi.

Linee guida di

sicurezza chimica

Per ridurre al minimo i pericoli relativi alle sostanze chimiche:

• Leggere con attenzione le informazioni contenute nelle MSDS fornite dalla ditta

produttrice delle sostanze chimiche o dei materiali pericolosi, prima di riporli in

magazzino, manipolarli o utilizzarli. (Vedere la sezione “Schede di sicurezza dei

materiali” a pagina xviii).

• Ridurre al minimo il contatto con le sostanze chimiche. Durante la manipolazione

dei rifiuti chimici, indossare gli opportuni corredi di protezione personale (ad

esempio occhiali di protezione, guanti o indumenti protettivi). Per ulteriori linee

guida relative alla sicurezza, consultare le MSDS.

• Ridurre al minimo l'inalazione delle sostanze chimiche. Non lasciare aperti i

contenitori delle sostanze chimiche e utilizzare tali sostanze solo in ambienti

adeguatamente ventilati (ad esempio, cappa di aspirazione). Per ulteriori linee guida

relative alla sicurezza, consultare le MSDS.

• Verificare regolarmente l'eventuale presenza di perdite o versamenti. In caso di

perdite o versamenti, attenersi alle procedure per la pulizia delineate dalla ditta

produttrice della sostanza chimica in questione nella MSDS ad essa corrispondente.

• Rispettare tutte le leggi e le norme locali, regionali/provinciali e statali relative alla

conservazione, alla manipolazione e allo smaltimento delle sostanze chimiche.

Premessa

Sicurezza dalle sostanze chimiche

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curva standard relativa e CT comparativo

RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.

xviii

Schede di

sicurezza dei

materiali

Le ditte produttrici di sostanze chimiche forniscono le schede MSDS nelle spedizioni di

sostanze chimiche pericolose ai nuovi clienti. Forniscono inoltre le MSDS al cliente alla

prima spedizione di una sostanza chimica pericolosa di cui è stato sviluppato un

aggiornamento delle MSDS. Le MSDS forniscono all'utente le informazioni di sicurezza

necessarie per la conservazione, la manipolazione, il trasporto e lo smaltimento sicuri

delle sostanze chimiche.

Qualora, alla consegna di un lotto di sostanze chimiche pericolose si riceva una scheda

MSDS aggiornata, accertarsi di sostituirla a quella in archivio.

Come ottenere

le schede di

sicurezza

Le schede di sicurezza delle sostanze chimiche fornite da Applied Biosystems sono

disponibili gratuitamente 24 ore al giorno. Per ottenere le schede di sicurezza:

1. Visitare il sito web https://docs.appliedbiosystems.com/msdssearch.html

2. Nel campo Search (Ricerca) della pagina MSDS Search (Ricerca MSDS):

a. Digitare il nome, il numero di catalogo o altre informazioni relativi alla

sostanza chimica che si pensa sia presente nel MSDS di interesse.

b. Selezionare la lingua desiderata.

c. Fare clic su Search (Ricerca).

3. Per visualizzare, scaricare o stampare il documento di interesse:

a. Fare clic con il pulsante destro sul titolo del documento.

b. Selezionare:

•Open (Apri) – Per visualizzare il documento

•Save Target As (Salva oggetto con nome) – Per scaricare una versione

PDF del documento in una destinazione da scegliere

•Print Target (Stampa destinazione) – Per stampare il documento

4. Per ottenere la copia di una scheda di sicurezza inviata via fax o via e-mail, nella

pagina Search Results (Risultati ricerca):

a. Selezionare Fax o E-mail sotto al titolo del documento.

b. Fare clic su RETRIEVE DOCUMENTS (RECUPERA DOCUMENTI) al

termine dell'elenco dei documenti.

c. Immettere le informazioni richieste.

d. Fare clic su View/Deliver Selected Documents Now (Visualizza/Consegna i

documenti selezionati adesso).

Nota: Per la MSDS di una sostanza chimica non distribuita da Applied Biosystems,

contattare la ditte produttrice della sostanza.

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Thermo Fisher Scientific Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System Manuale del proprietario

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