Roche uPath IVD Manuale utente

Marca: Roche

Modello: uPath IVD

Tipo: Manuale utente

Guida all’algoritmo di analisi delle

immagini della mammella uPath HER2

(4B5)

Sommario

Introduzione 1

Riepilogo e spiegazione dell’algoritmo 2

Uso previsto 3

Uso previsto del prodotto 3

Obiettivo della guida all’algoritmo 3

Signiﬁcatività clinica 4

Principi del test 5

Limitazioni 6

Caratteristiche di rete 7

Sicurezza dei dati 8

Flusso di lavoro per l’uso dell’algoritmo uPath HER2 (4B5) 9

Flusso di lavoro del patologo 11

Caratteristiche della colorazione 18

Valutazione dell’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) 18

Valutazione della colorazione con l’algoritmo uPath HER2 (4B5) 18

Caratteristiche prestazionali 30

Confronto metodologico 30

Studi di riproducibilità del patologo 31

Studi di riproducibilità dello scanner 32

Risoluzione dei problemi 33

Bibliograﬁa 37

Introduzione

Roche uPath enterprise software (uPath enterprise software)

con l’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath

HER2 (4B5) (algoritmo uPath HER2 (4B5)) è un sistema software

progettato come ausilio per la valutazione semi-quantitativa

dell’espressione della proteina nota come recettore del fattore di

crescita dell’epidermide umano 2 (HER2) in sezioni istologiche

colorate mediante immunoistochimica preparate da tessuti normali

e neoplastici ﬁssati in formalina e inclusi in parafﬁna (FFPE).

uPath enterprise software è una soluzione software end-to-end

per patologia digitale che permette ai laboratori di patologia

di acquisire, gestire, visualizzare, analizzare, condividere ed

elaborare report su immagini digitali di campioni di anatomia

patologica. Utilizzando uPath enterprise software, il patologo

può visualizzare immagini digitali a vari ingrandimenti,

aggiungere annotazioni, effettuare misurazioni su sezioni di

tessuto, eseguire l’analisi delle immagini e generare report.

Nota: l’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath

HER2 (4B5) è una metodologia computerizzata aggiuntiva,

concepita come ausilio per l’acquisizione e la misurazione

di immagini da vetrini di vetro per microscopio preparati

con campioni di tessuto mammario sottoposti a colorazione

immunoistochimica per determinare la presenza della proteina

HER2. Per assicurare la validità dei punteggi ottenuti mediante

l’analisi delle immagini, è responsabilità del patologo veriﬁcare la

concordanza e utilizzare controlli appropriati come speciﬁcato

nella scheda metodologica dell’anticorpo VENTANA anti-HER2/

neu (4B5) (disponibile sul sito dialog.roche.com).

1 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Riepilogo e spiegazione dell’algoritmo

Per le applicazioni di analisi delle immagini, il patologo utilizza

uPath enterprise software per selezionare e tracciare il

contorno di una o più regioni di interesse (ROI); ciascuna ROI

può essere visualizzata a vari ingrandimenti e poi analizzata

mediante l’algoritmo uPath HER2 (4B5). Viene quindi generato

un conteggio del numero totale di cellule tumorali bersaglio e

le cellule tumorali vengono stratiﬁcate in base alla colorazione

o all’assenza di colorazione. Le cellule colorate vengono

stratiﬁcate in base all’intensità della colorazione e alla

completezza della colorazione della membrana. L’algoritmo

uPath HER2 (4B5) combina la percentuale di cellule colorate

(colorate, non colorate), l’intensità della colorazione (debole,

media, forte) e la completezza della colorazione (non colorata,

parziale, completa) per generare un punteggio relativo a HER2 su

una scala da 0 a 3+. L’algoritmo uPath HER2 (4B5) può generare

un punteggio per una speciﬁca ROI oppure un punteggio

aggregato per tutte le ROI selezionate su un determinato vetrino.

Il patologo può accettare il punteggio assegnato dall’algoritmo

uPath HER2 (4B5) oppure sovrascrivere tale punteggio

assegnandone uno diverso. L’algoritmo uPath HER2 (4B5) non

esegue interpretazioni indipendenti dei dati e pertanto deve

essere utilizzato unicamente da un patologo qualiﬁcato in

combinazione con l’esame istologico, le informazioni cliniche

pertinenti e i controlli appropriati. L’algoritmo uPath HER2

(4B5) è progettato e indicato come ausilio per il patologo per la

valutazione dell’espressione della proteina HER2 in campioni di

tessuto mammario colorati con l’anticorpo VENTANA anti-HER2/

neu (4B5).

2 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Uso previsto del prodotto

L’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath

HER2 (4B5) è destinato all’uso come ausilio per il patologo per

la rilevazione semi-quantitativa della proteina HER2 in tessuto

mammario neoplastico ﬁssato in formalina e incluso in parafﬁna.

Quando è utilizzato con VENTANA anti-HER2/neu (4B5) Rabbit

Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-HER2/

neu (4B5)) è indicato per l’uso come ausilio per la valutazione

di pazienti con carcinoma mammario per i quali vengono presi

in considerazione i trattamenti con Herceptin

(trastuzumab),

KADCYLA

(ado-trastuzumab emtansine) o PERJETA

(pertuzumab).

Nota: l’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath

HER2 (4B5) è una metodologia computerizzata aggiuntiva,

concepita come ausilio per l’acquisizione e la misurazione di

immagini da vetrini di vetro per microscopio preparati con campioni

di tessuto mammario sottoposti a colorazione immunoistochimica

per determinare la presenza della proteina HER2. Per assicurare

la validità dei punteggi ottenuti mediante l’analisi delle immagini, è

responsabilità del patologo veriﬁcare la concordanza e utilizzare

controlli appropriati come speciﬁcato nella scheda metodologica

dell’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

Questo algoritmo è indicato per uso diagnostico in vitro (IVD).

Uso previsto

Obiettivo della guida all’algoritmo

La presente guida all’algoritmo uPath HER2 (4B5) (guida

all’algoritmo) ha come obiettivi:

• Fornire informazioni di base sull’uso previsto dell’algoritmo

uPath HER2 (4B5), sui principi del test e sulle sue limitazioni.

• Deﬁnire i materiali necessari e i requisiti informatici, di sicurezza

dei dati e di rete.

• Fornire istruzioni passo-passo per l’esecuzione dell’algoritmo

uPath HER2 (4B5).

• Presentare immagini fotograﬁche che illustrano come deve

essere utilizzato l’algoritmo uPath HER2 (4B5).

• Offrire uno strumento che faciliti l’uso dell’algoritmo uPath

HER2 (4B5) su sezioni di tessuto mammario FFPE colorate con

l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

• Mostrare immagini esempliﬁcative relative a casi di difﬁcile

interpretazione per fornire orientamenti su come utilizzare

l’algoritmo uPath HER2 (4B5) per la loro valutazione.

• Presentare le caratteristiche prestazionali dell’algoritmo uPath

HER2 (4B5).

3 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Signiﬁcatività clinica

Il carcinoma mammario è il carcinoma più comune nelle donne

e la seconda causa principale di decessi correlati al cancro.

1,2

In America del Nord la probabilità che una donna sviluppi il

carcinoma mammario è pari a una su otto.

Rilevazione precoce

e terapie adeguate possono incidere in misura signiﬁcativa sulla

sopravvivenza globale.

3,4

Piccoli campioni di tessuto possono

essere facilmente utilizzati nell’immunoistochimica (IHC) di

routine, rendendo questa tecnica, in abbinamento agli anticorpi

che rilevano gli antigeni importanti per l’interpretazione del

carcinoma, uno strumento efﬁcace per il patologo nella diagnosi

e prognosi della malattia. Attualmente l’oncoproteina HER2 è

un importante indicatore del carcinoma mammario.

5,6,7,8

È stato

dimostrato che i farmaci terapeutici Herceptin (trastuzumab),

KADCYLA (ado-trastuzumab emtansine) e PERJETA

(pertuzumab) apportano beneﬁci ad alcuni pazienti affetti da

carcinoma mammario arrestando e in alcuni casi invertendo la

crescita tumorale.

5,6,7,8,9

Tali farmaci sono anticorpi monoclonali

umanizzati che si legano alla proteina HER2 sulle cellule

tumorali.

5,8,9,10

Le analisi diagnostiche in vitro mirate alla valutazione dello

stato HER2 nei pazienti affetti da carcinoma mammario sono

importanti come ausilio per il medico nella determinazione

della terapia HER2-mirata.

5,6,7,8

L’anticorpo VENTANA anti-

HER2/neu (4B5) è destinato all’uso nella rilevazione basata

su IHC dell’espressione della proteina HER2 nel carcinoma

mammario. L’algoritmo uPath HER2 (4B5) funge da complemento

all’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) per agevolare la

valutazione dei pazienti affetti da carcinoma mammario per i

quali viene preso in considerazione il trattamento con Herceptin

(trastuzumab), KADCYLA (ado-trastuzumab emtansine) o

PERJETA (pertuzumab).

4 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Principi del test

Criteri relativi all’intensità e al pattern della colorazione

della membrana cellulare per il punteggio assegnato

dall’algoritmo uPath HER2 (4B5):

Pattern di colorazione Punteggio Valutazione

colorazione

HER2

Nessuna colorazione osservata a

livello della membrana

0 Negativa

Fievole colorazione parziale della

membrana rilevata in una qualsiasi

percentuale delle cellule tumorali

1+ Negativa

Colorazione completa da debole a

moderata della membrana rilevata

in una percentuale >10% delle

cellule tumorali

2+ Equivoca*

Colorazione completa intensa

della membrana rilevata in una

percentuale >10% delle cellule

tumorali

3+ Positiva

* Si consiglia il reﬂex test tramite ISH

uPath enterprise software con l’algoritmo uPath HER2 (4B5)

impiega tecniche di analisi delle immagini per ottenere un

punteggio relativo a HER2.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) utilizza parametri predeﬁniti per

assegnare un punteggio alle immagini di tessuto colorato con

l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

Fasi dell’analisi delle immagini:

• Rilevamento delle cellule nell’intera immagine.

• Classiﬁcazione delle cellule come cellule tumorali o cellule di

altro tipo.

• Identiﬁcazione della membrana colorata e stratiﬁcazione della

membrana in categorie: colorazione parziale o completa e

colorazione di intensità debole, media o forte.

• Calcolo del punteggio HER2 mediante la combinazione della

classiﬁcazione delle cellule, dell’intensità della colorazione e

della classiﬁcazione della membrana.

Modalità di identiﬁcazione delle cellule tumorali da

parte dell’algoritmo di analisi delle immagini per HER2 e

modalità di calcolo del punteggio:

• L’algoritmo uPath HER2 (4B5) identiﬁca le cellule tumorali

valutando colore, intensità, dimensioni e caratteristiche

morfologiche.

• Le cellule tumorali identiﬁcate vengono classiﬁcate come

colorate in base al rilevamento della membrana e a soglie

preimpostate.

• Per calcolare il punteggio HER2, l’algoritmo uPath HER2 (4B5)

utilizza le cellule colorate identiﬁcate e le stratiﬁca in base

all’intensità e alla completezza della colorazione.

5 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) è progettato per funzionare con

l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5). La correttezza dei

risultati del test dipende dalla qualità e dall’accuratezza del

vetrino IHC di cui viene acquisita l’immagine e dell’immagine

acquisita che viene quindi analizzata.

Il patologo deve convalidare la corsa di colorazione con

l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) mediante esame

manuale al microscopio dei vetrini di controllo per HER2 al ﬁne

di veriﬁcare che siano stati ottenuti i risultati attesi prima di

procedere all’accettazione delle immagini dei vetrini in uPath

enterprise software per analizzarli.

Occorre seguire le indicazioni del produttore relative

all’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), compreso l’uso di

tutto il materiale per il controllo di qualità positivo e negativo in

ogni corsa di colorazione. Se i vetrini di controllo non vengono

ritenuti accettabili all’esame manuale al microscopio, occorre

ripetere la colorazione dei tessuti in modo da ottenere risultati

accettabili.

Il patologo deve seguire le indicazioni per l’interpretazione dei

risultati ottenuti con l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) è progettato per essere

utilizzato da un patologo qualiﬁcato in combinazione con

l’esame istologico, le informazioni cliniche pertinenti e i

controlli appropriati. Non è destinato all’uso come strumento

indipendente e richiede l’intervento di un operatore competente

durante l’intero processo di analisi.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) può generare punteggi errati

se le immagini acquisite presentano una colorazione anomala

(colorazione nucleare, pigmentazione, ecc.).

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) può escludere i nuclei tumorali che

appaiono allungati, indipendentemente dalla forma complessiva

della cellula. Per tale motivo, potrebbe essere necessario

valutare manualmente i tumori che contengono un elevato

numero di cellule con nuclei tumorali allungati.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) è stato addestrato, sviluppato e

convalidato su: carcinomi lobulari invasivi, duttali, mucinosi,

midollari, papillari e micropapillari, nonché su alcune lesioni

metastatiche.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) non è stato testato, né la sua

sicurezza ed efﬁcacia sono state convalidate, quando viene

utilizzato con un personal computer (PC) da casa.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) identiﬁca membrane colorate con

DAB con qualsiasi livello di intensità e completezza. L’algoritmo

utilizza una soglia di rumore pari allo 0,5% di tutte le cellule

tumorali per assegnare a un caso il punteggio 1+. Non segue

l’indicazione riportata nella scheda metodologica di utilizzare

una soglia a livello di singola cellula per l’assegnazione di un

punteggio 1+. In alcuni casi caratterizzati dalla presenza di un

numero molto ridotto di cellule che presentano colorazione

della membrana, ciò potrebbe determinare l’assegnazione

del punteggio 0 anziché 1+. Questa soglia di rumore è stata

introdotta per garantire che ai casi veri negativi venga assegnato

il punteggio 0.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) è progettato per essere sensibile

al colore marrone (colorazione DAB) al ﬁne di garantire

che la colorazione della membrana venga rilevata anche

quando è ﬁevole. Per tale motivo, può classiﬁcare in maniera

errata campioni di tessuto contenenti artefatti marroni quali

pigmentazione, colorazione di fondo in ﬁbre muscolari o qualsiasi

altro artefatto che appaia di colore marrone. uPath enterprise

software dispone di strumenti che permettono al patologo di

escludere aree di questo tipo. Tali strumenti sono illustrati in

maggior dettaglio nella sezione relativa alle caratteristiche della

colorazione.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) è progettato per essere sensibile

ai casi 2+. Per questa ragione, l’algoritmo uPath HER2 (4B5)

può assegnare erroneamente il punteggio 2+ a certi casi 1+.

Nello speciﬁco, i casi 1+ per i quali la percentuale di cellule

tumorali a colorazione completa è leggermente inferiore a

10% o i casi con un’alta quantità di colorazione citoplasmatica

delle cellule tumorali possono essere erroneamente valutati

come 2+. In queste particolari tipologie di casi il patologo può

dover sovrascrivere il punteggio. La colorazione citoplasmatica

è discussa in maggior dettaglio nella sezione relativa alle

caratteristiche della colorazione.

Limitazioni

6 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

7 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Caratteristiche di rete

Si consiglia una connessione di rete a 1Gbps tra uPath enterprise software e il sistema di gestione delle immagini (IMS).

Tabella 1. Speciﬁche del server per l’analisi delle immagini con Roche uPath per laboratori di piccole dimensioni.

Parametro Dettagli

Processore CPU a 3,6GHz

Numero di core 4

RAM 6 x 8GB (48GB)

Hyper-threading Disabilitata

Disco rigido SSD da 240GB

Sistema operativo Microsoft Windows Server 2016

Macchina virtuale (VM) Sì

Ulteriori informazioni sulla VM Le prestazioni saranno diverse da quelle dei server ﬁsici a causa dell’overhead introdotto

dalla VM.

Antivirus Symantec Endpoint Protection versione 12

Alimentazione 110V/220V, 800Watt (2)

Porte 2 USB, adattatore HPE Eth 10/25Gb

Gruppo di continuità Raccomandato

Tabella 2. Speciﬁche del server per l’analisi delle immagini con Roche uPath per laboratori di dimensioni da medie a grandi.

Parametro Dettagli

Processore CPU a 3,6GHz (2 processori)

Numero di core 8 per processore, 16 in totale

RAM 12 x 8GB (96 GB)

Hyper-threading Disabilitata

Disco rigido SSD da 240GB (2x)

Sistema operativo Microsoft Windows Server 2016

Macchina virtuale (VM) Sì

Ulteriori informazioni sulla VM Le prestazioni saranno diverse da quelle dei server ﬁsici a causa dell’overhead introdotto

dalla VM.

Antivirus Symantec Endpoint Protection versione 12

Alimentazione 110V/220V, 800Watt (2)

Porte 2 USB, adattatore HPE Eth 10/25Gb

Gruppo di continuità Raccomandato

L’uso di software dannoso o l’accesso non autorizzato allo

strumento possono causare la perdita di dati o l’indisponibilità

dello strumento.

Per evitare l’infezione da parte di software dannoso o

l’accesso non autorizzato e l’uso improprio dello strumento, è

fondamentale seguire le seguenti indicazioni:

• Non installare o eseguire nessun altro software sullo strumento.

• Assicurarsi che gli altri computer e servizi della rete siano sicuri

e adeguatamente protetti da software dannoso e dall’accesso

non autorizzato. Ciò vale, per esempio, per il sistema di

informazioni di laboratorio (LIS), la condivisione di archiviazione,

il backup o l’assistenza.

• I clienti sono responsabili della sicurezza della propria rete

locale, in particolare della protezione della rete da software

dannoso e attacchi. Tale protezione potrebbe comprendere

misure, come un ﬁrewall, atte a separare il dispositivo da reti non

controllate. Inoltre, potrebbe includere misure che garantiscano

che la rete connessa non contenga codici dannosi.

• Limitare l’accesso ﬁsico allo strumento e a tutte le infrastrutture

informatiche collegate (computer, cavi, dispositivi di rete e così

via).

• Assicurarsi che i ﬁle di backup e di archiviazione dello

strumento siano protetti dall’accesso non autorizzato e

da eventuali eventi calamitosi. Ciò include la posizione di

archiviazione remota, siti di ripristino di emergenza e il

trasferimento sicuro dei ﬁle di backup.

• Se possibile, utilizzare un ﬁrewall per limitare il trafﬁco di rete.

• Le unità di memoria ﬂash USB possono essere utilizzate per

vari tipi di backup e ripristino. Se usata in maniera impropria,

un’unità di memoria ﬂash USB può causare la perdita di dati o il

malfunzionamento dello strumento.

• Utilizzare unicamente unità di memoria ﬂash USB testate e

installate dall’assistenza Roche locale.

• È possibile utilizzare un solo dispositivo USB per volta. Prima

di inserire un’unità di memoria ﬂash USB, controllare che non

siano collegati altri dispositivi USB.

• Per rimuovere un’unità di memoria ﬂash USB, scegliere il

pulsante di espulsione in Windows.

• La conﬁgurazione predeﬁnita del sistema operativo (SO)

fornita con il server non deve essere alterata, poiché eventuali

alterazioni avrebbero implicazioni sulle conﬁgurazioni di

protezione avanzata del SO.

Sicurezza dei dati

• Per evitare che uPath enterprise software possa essere infettato

da virus, utilizzare l’unità di memoria ﬂash USB esclusivamente

sullo strumento. Non memorizzare altri dati su questa unità di

memoria ﬂash USB.

8 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Flusso di lavoro per l’uso dell’algoritmo uPath HER2 (4B5)

Materiali forniti

• Algoritmo uPath HER2 (4B5)

Materiali necessari ma non forniti

• uPath enterprise software

• Vetrini di tessuto mammario colorati con l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) utilizzando ultraView Universal DAB Detection Kit

su uno strumento BenchMark ULTRA.

• Scanner per vetrini VENTANA DP 200

Avvertenze e precauzioni

1. Per uso diagnostico in vitro (IVD).

2. Solo per uso professionale.

3. ATTENZIONE: negli Stati Uniti le leggi federali consentono la vendita di questo dispositivo solo da parte di un medico o solo su

prescrizione medica. (Rx Only)

4. Per segnalare gravi incidenti sospetti associati a questo dispositivo, contattare il rappresentante locale Roche e l’autorità competente

dello stato membro o del paese di residenza dell’utente.

Flusso di lavoro

1. Il tessuto mammario preparato su un vetrino di vetro viene colorato con l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) utilizzando uno

strumento BenchMark ULTRA.

2. Viene eseguita l’acquisizione dell’immagine (scansione dell’intero vetrino) con lo scanner per vetrini VENTANA DP 200 con un

ingrandimento 20x su un piano z.

3. Dopo l’acquisizione delle immagini digitali, queste vengono trasferite dal computer associato allo scanner per vetrini VENTANA DP 200 al

sistema di gestione delle immagini (IMS) su un server centralizzato.

4. In seguito al trasferimento sul server, viene creato un caso in uPath enterprise software. La creazione del caso può avvenire

automaticamente mediante comunicazione con il sistema di informazioni di laboratorio (LIS) utilizzando le informazioni di

identiﬁcazione (ovvero tipo di tessuto e anticorpo primario) contenute nell’etichetta barcode del vetrino oppure mediante inserimento

manuale in uPath enterprise software. Fare riferimento alla Guida per l’utente di uPath enterprise software (PN 1018943IT).

5. Se l’algoritmo uPath HER2 (4B5) è installato (deve essere installato su un server distinto da quello di uPath enterprise software e

dell’IMS) e si procede all’accettazione di un’immagine 20x con il tipo di tessuto e di colorazione appropriati, uPath enterprise software

avvia automaticamente l’analisi dell’intero vetrino (WSA).

6. La WSA analizza automaticamente l’intera immagine scansionata.

7. Al termine della WSA, il visualizzatore di uPath enterprise software notiﬁca il patologo con una barra blu che recita “analysis

successful” (analisi riuscita).

8. Il patologo può selezionare ROI speciﬁche alle quali assegnare un punteggio utilizzando gli strumenti ROI ed Exclusion (Esclusione) in

uPath enterprise software.

9. Il patologo esamina i risultati dell’analisi dell’immagine e può accettare il punteggio o sovrascriverlo manualmente.

Colorazione

• La preparazione e la colorazione del tessuto devono seguire le indicazioni fornite nella scheda metodologica dell’anticorpo VENTANA

anti-HER2/neu (4B5).

9 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

• Devono essere esaminati tutti i controlli appropriati e, se la colorazione dei vetrini non rispetta le indicazioni riportate nella scheda

metodologica dell’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), sarà necessario ripeterla.

• L’algoritmo uPath HER2 (4B5) richiede l’uso dell’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) e di qualsiasi altro accessorio o materiale

aggiuntivo indicato nella relativa scheda metodologica per la colorazione dei tessuti prima dell’analisi.

• L’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) rileva la proteina HER2 in tessuto mammario FFPE colorato con ultraView Universal DAB

Detection Kit su uno strumento BenchMark ULTRA.

Acquisizione dell’immagine

Per la scansione dei vetrini è necessario uno scanner per vetrini VENTANA DP 200. La scansione delle immagini deve essere eseguita

con un ingrandimento 20x. Si raccomanda di veriﬁcare che il tessuto sia privo di pieghe e di aree con presenza di inchiostro. Se ampie

sezioni dell’immagine non sono a fuoco, si raccomanda di ripetere la scansione dei vetrini. Per ulteriori informazioni sulla scansione,

fare riferimento alla Guida per l’utente IVD dello scanner per vetrini VENTANA DP 200 (PN1017149IT).

Navigazione generale: uPath enterprise software

uPath enterprise software è progettato per consentire la personalizzazione di varie funzionalità, tra cui la conﬁgurazione dei report

e l’interfaccia utente, in base alle esigenze individuali e a quelle del centro. La presente guida all’algoritmo descrive unicamente gli

strumenti necessari per l’uso dell’algoritmo uPath HER2 (4B5). Per ulteriori informazioni su uPath enterprise software fare riferimento

alla Guida per l’utente di uPath enterprise software.

10 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Flusso di lavoro del patologo

Apertura di un caso in uPath enterprise software

Per accedere alle immagini di tessuto mammario colorato con l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), fare doppio clic su un caso

o selezionare un caso e premere la scheda Viewer (Visualizzatore) (Figura 1).

Verrà visualizzata una schermata con tutte le immagini associate al caso (Figura 2).

Figura 2

Figura 1

11 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Una volta che un vetrino colorato con l’anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) è stato scansionato su uno scanner per vetrini

VENTANA DP 200 con un ingrandimento 20x, l’immagine viene importata in uPath enterprise software e associata a un caso.

L’algoritmo uPath HER2 (4B5) avvierà automaticamente la WSA. Il tempo necessario per il completamento della fase di pre-

computazione della WSA dipende dalle speciﬁche del server, dalle dimensioni dell’immagine e dal numero di immagini in coda. La

visualizzazione del messaggio “waiting to start auto-analysis” (in attesa di iniziare l’auto-analisi) indica che le immagini sono in coda

e devono ancora essere analizzate, mentre quando la WSA è in corso viene visualizzato il messaggio “analyzing” (analisi in corso)

(Figura 3 e Figura 4).

Una volta che uPath enterprise software ha completato l’analisi dell’immagine mediante la WSA, in Viewer (Visualizzatore) compare il

messaggio “analysis successful” (analisi riuscita) sotto l’immagine del vetrino (Figura 5). Non è possibile assegnare un punteggio alle

immagini prima che la WSA sia stata completata correttamente.

Figura 5

Figura 4

Figura 3

12 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Disegno della/e ROI dell’intero tumore: selezione dell’area tumorale

Utilizzare il pulsante dello strumento Freehand (Mano libera) nel menu a discesa ROI (Figura 6) per selezionare l’area o le aree

tumorali sull’immagine del vetrino IHC da analizzare. La Figura 7 mostra un’immagine in cui è disegnata una singola ROI. È possibile

disegnare altre ROI. Ogni area selezionata determinerà la comparsa di una ROI nel riquadro Slide Panel (Pannello vetrini) (Figura 8).

Figura 7

Figura 8

Figura 6

13 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Disegno della/e ROI dell’intero tumore: area di esclusione

Quando si tracciano le ROI potrebbe essere necessario escludere determinate aree; le speciﬁche aree da evitare od omettere saranno

descritte più avanti, insieme a opportuni esempi, nella sezione relativa alle caratteristiche della colorazione. Utilizzare lo strumento di

esclusione Freehand (Mano libera) nel menu a discesa Exclusion (Esclusione) (Figura 9) per escludere aree speciﬁche (Figura 10). Se

ampie aree dell’immagine appaiono poco chiare o sfocate, ripetere la scansione del vetrino.

Le aree escluse non saranno analizzate dall’algoritmo uPath HER2 (4B5) e le cellule tumorali colorate e non colorate presenti in tale

area saranno escluse dall’area di analisi totale. Se la ROI è già stata analizzata e si speciﬁca un’esclusione, sarà necessario ripetere

l’analisi della ROI; la sovrimpressione e il punteggio verranno aggiornati di conseguenza.

Tracciare un numero elevato di esclusioni, in particolare aree complicate con lo strumento Freehand (Mano libera), è una procedura

dispendiosa in termini di tempo e può inﬂuire sull’efﬁcienza del ﬂusso di lavoro pur avendo un impatto solo marginale sul punteggio

ﬁnale. Se un caso richiede un numero elevato di esclusioni, il patologo deve

• Tracciare diverse ROI ed escludere le porzioni di tessuto per le quali ritiene che sia impossibile assegnare un punteggio, riducendo al

minimo l’uso dello strumento Exclusion (Esclusione).

• Limitare le esclusioni e sovrascrivere manualmente il punteggio con un punteggio diverso.

Disegno della/e ROI dell’intero tumore: eliminazione

Se una ROI dell’intero tumore selezionata non è ottimale, è possibile eliminarla. Selezionare la ROI dell’intero tumore facendo clic al

centro della ROI sull’immagine, quindi fare clic sul pulsante Delete (Elimina) nel riquadro Slide Panel (Pannello vetrini) (Figura 11) o

all’interno dell’immagine del vetrino accanto alla ROI (Figura 12). Verrà visualizzata una ﬁnestra di conferma. Selezionare Conﬁrm

(Conferma) per eliminare la ROI selezionata. Selezionare Cancel (Annulla) per annullare l’eliminazione della ROI.

Figura 9

Figura 11

Figura 12

Figura 10

14 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Una volta che sono state disegnate tutte le ROI dell’intero tumore e/o le aree di esclusione, l’immagine è pronta per essere analizzata.

Selezionare la ROI dell’intero tumore facendo clic al centro della ROI da analizzare o facendo clic sulla ROI nel riquadro Slide Panel

(Pannello vetrini). Per ciascuna ROI, fare clic sul pulsante Image Analysis (Analisi dell’immagine) nel riquadro Slide Panel (Pannello

vetrini) (Figura 13) o accanto alla ROI (Figura 14).

Una volta che l’analisi di HER2 è stata completata, il risultato viene visualizzato in due zone del riquadro Slide Panel (Pannello vetrini):

sotto Slide Score (Punteggio vetrino) e accanto alle ROI (Figura 15). Lo Slide Score (Punteggio vetrino) è basato su una sommatoria

dello stato di HER2 su tutte le ROI selezionate e corrisponde al punteggio che comparirà nel report.

È anche possibile visualizzare informazioni più dettagliate nella ﬁnestra a comparsa Slide Score (Punteggio vetrino) e nella ﬁnestra

a comparsa ROI Details (Dettagli ROI) facendo clic sull’icona della ﬁnestra a comparsa (Figura 16). Verrà visualizzata la ﬁnestra a

comparsa Slide Score (Punteggio vetrino) (Figura 17). Per nascondere queste informazioni, è sufﬁciente fare nuovamente clic sulla

stessa icona della ﬁnestra a comparsa.

Figura 15

Figura 17

Figura 16

Figura 13

Figura 14

15 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

Analisi delle immagini HER2: colore in sovrimpressione

Una volta premuto il pulsante ROI(s) Analysis (Analisi della/e ROI) e analizzato il tessuto, sulla ROI verrà visualizzato colore in

sovrimpressione. Nell’immagine che segue (Figura 18), il colore rosso in sovrimpressione rappresenta le membrane cellulari

interpretate come colorate positivamente per HER2. Quando si afferra l’immagine (premendo il pulsante sinistro del mouse e

spostando l’immagine), il colore in sovrimpressione scompare (Figura 19). Quando si rilascia il pulsante del mouse, il colore in

sovrimpressione ricompare (Figura 18).

Figura 18

Figura 19

16 Guida all’algoritmo di analisi delle immagini della mammella uPath HER2 (4B5)

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Roche uPath IVD Manuale utente

Marca: Roche

Modello: uPath IVD

Tipo: Manuale utente

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Roche uPath IVD Manuale utente

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